南京农业大学学报 /oa 封面 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180200 2018年03月27 00:00 2018年2期 0 0 508271 目录 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802000 2018年03月27 00:00 2018年2期 0 0 785934 光谱与光密度影响马铃薯试管薯诱导发育的研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802001 马铃薯试管薯诱导是构建种薯工厂化生产的现代繁种工业体系的关键技术之一,但该技术正受制于试管薯诱导率低及个体质量小的问题。试管薯的生育进程包括试管苗壮苗、试管薯诱导和膨大,并受基因、物理环境和外源激素等因素的影响。作为物理环境因子,光驱动植物的生命活动,光密度与光谱对试管薯的诱导、膨大期物质积累以及光合产物的转运具有重要调节作用。近年来,人们逐渐意识到光环境因子优化是提高马铃薯脱毒试管薯产量和质量的可行途径之一。试管薯是植物储藏器官,探索光密度和光谱影响其生育进程的机制,将有助于从物理光谱角度,更精细地获取光谱调控植物储藏器官发育的知识,有助于试管薯产量与质量的提升。 2018年03月27 00:00 2018年2期 195 202 974503 徐志刚, 李瑞宁, 黄文文 乙烯调控植物耐涝机制的研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802002 随着全球气候变暖和极端天气的频发,涝害已成为农业的主要自然灾害之一,造成严重的经济损失。为了适应涝渍环境,植物通过乙烯等信号物质调控涝渍胁迫应答。本文从涝渍胁迫下乙烯的合成、乙烯信号转导途径关键基因及调控机制、乙烯信号介导的耐涝形态适应机制、乙烯信号与低氧信号交互对话等方面阐述了乙烯调控植物的耐涝机制,并提出了今后的研究方向,以期为植物涝害应对及耐涝新品种选育提供理论指导。 2018年03月27 00:00 2018年2期 203 208 1131873 陈发棣, 陈素梅, 宋爱萍, 蒋甲福, 赵楠, 苏江硕 蚜虫共生菌感染格局、动态及在宿主种群分化中的作用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802003 蚜虫体内感染共生菌的现象较为普遍。共生菌在蚜虫种群的存活、繁衍和应对外界压力等方面发挥着重要作用。蚜虫种群感染共生菌的种类和组成模式多样,这有利于蚜虫种群应对多变的环境。共生菌生活于宿主昆虫体内。宿主感染共生菌的种类和数量动态受宿主的遗传背景和生态适应力、外界环境条件等多种因素的影响。共生菌具有为宿主提供营养、消化植物组织和降解植物毒素等功能,从而影响宿主昆虫的寄主利用范围。原生和次级共生菌可引起宿主蚜虫寄主范围的改变,赋予蚜虫利用新寄主的能力,从而促进种群的分化。蚜虫体内通常有多种共生菌共存,共生菌种间关系会影响共生菌种群动态和生物功能的表现。因此,在共生菌群落层次上探明蚜虫-共生菌-寄主植物三者间的关系将是今后研究的重点。 2018年03月27 00:00 2018年2期 209 217 1027065 刘向东, 张元臣 猪黏膜免疫:前景与挑战 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802004 呼吸道和消化道黏膜是大多数病原微生物入侵机体的门户。通过黏膜免疫建立局部免疫力可直接切断病原微生物的入侵途径。近几年由黏膜入侵引起的猪传染病越来越多,给我国养猪业造成了巨大的经济损失。因此,猪黏膜免疫研究倍受关注。本文首先介绍了口服免疫和鼻腔免疫的特点和挑战,然后针对这些挑战对疫苗设计的进展进行了概述。应用免疫增强剂和抗原递送载体可有效提高口服抗原的效果,口服免疫和鼻腔免疫是预防猪传染病有效的免疫途径。本文为有效设计猪黏膜疫苗提供了合理的建议和策略。 2018年03月27 00:00 2018年2期 218 222 894426 杨倩 基于药物溶解性和渗透性测定的生物药剂分类系统在兽药制剂研发的应用前景 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802005 生物药剂分类系统(BCS)是基于药物溶解性和渗透性测定的药物分类预测系统,目前被FDA、WHO、EMA等权威机构认可并应用于人用药物豁免其体内生物等效性研究。鉴于兽药研发成本及利润等问题,将BCS概念应用于兽药制剂研发领域,势在必行。但是人与动物在解剖、生理学等方面以及在临床使用的药物种类上均存在较大差异,故不能进行直接的种间外推,尚待深入研究以解决局限性和方法问题,才能付诸应用。尽管如此,美国药典专家委员会的特别委员会已经建议将BCS应用于犬,此举无疑具有典范作用和重要的现实意义。 2018年03月27 00:00 2018年2期 223 230 957952 王丽平, 刘洋, 宋阳 水稻心白突变体<i>whc</i>的理化性质和基因定位 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802006 <b>[目的]</b>淀粉约占水稻胚乳干物质总量的80%,胚乳中淀粉的组分与含量以及颗粒结构对稻米品质具有重要影响。因此,阐明水稻淀粉合成的分子机制对品质改良具有重要意义。<b>[方法]</b>通过<sup>60</sup>Co-γ辐照诱变粳稻品种‘中花11’(ZH11),得到1个稳定遗传的胚乳心白突变体<i>white core</i>(<i>whc</i>)。对该突变体的形态学特征、理化性质、淀粉结构等性状进行了分析,并对突变体<i>whc</i>和‘N22’杂交配制的F<sub>2</sub>群体进行基因定位。<b>[结果]</b>与野生型相比,该突变体表现为胚乳中心粉质不透明,粒宽与有效穗数增加,千粒质量下降14.5%。<i>whc</i>突变体成熟种子的直链淀粉含量减少24.7%,而总蛋白含量变化不明显。胚乳横截面扫描电镜分析发现,突变体<i>whc</i>的粉质胚乳部位淀粉粒异常。挑选极端单株将<i>whc</i>精细定位在Chr 4染色体长臂的RM349和d1分子标记之间,物理距离为158 kb。测序发现<i>whc</i>突变体中1个编码三角状四肽重复结构域蛋白[tetratricopeptide repeat(TPR)domain containing protein]的基因发生点突变,导致蛋白翻译提前终止。qRT-PCR分析显示,<i>whc</i>突变体中编码AGPase各亚基以及部分淀粉合酶的相关基因表达量发生改变。<b>[结论]</b>水稻心白突变体<i>whc</i>的表型可能是由1个编码TPR蛋白结构域的基因控制。 2018年03月27 00:00 2018年2期 231 239 2363229 刘子文, 胡曼曼, 王致远, 张瑜竣, 谷晗, 游佳, 王益华, 江玲, 刘玲珑 不结球白菜醛酮还原酶<i>BcAKR4C9</i>基因的克隆及表达分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802007 <b>[目的]</b>本文旨在探究醛酮还原酶AKR4C亚家族<i>BcAKR4C9</i>基因在不同激素处理及逆境胁迫中的表达模式,从而分析<i>BcAKR4C9</i>基因在不结球白菜作物中的生长代谢和逆境胁迫中可能发挥的作用。<b>[方法]</b>以不结球白菜‘苏州青’为材料,克隆了<i>BcAKR4C9</i>基因的全长,应用生物信息学分析了其氨基酸序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析<i>BcAKR4C9</i>基因在不同组织,高温、低温、NaCl胁迫、伤害胁迫,以及水杨酸、茉莉酸甲酯和脱落酸等处理下的基因表达变化。<b>[结果]</b>序列分析表明,<i>BcAKR4C9</i>基因包含1个长度为948 bp的开放式阅读框(ORF),编码315个氨基酸。氨基酸序列多重比对和进化树分析表明,<i>BcAKR4C9</i>与其他植物<i>AKR4C9</i>基因同源性较高,具有高度保守性。荧光定量PCR分析表明,<i>BcAKR4C9</i>在叶片中的表达量高于根中,高温和低温处理下表达上调,且具有相似的表达模式。在0~20 g·L<sup>-1</sup>NaCl质量浓度范围内基因相对表达量随NaCl质量浓度的升高而升高,伤害处理后能够迅速产生应激响应,并能够被水杨酸、茉莉酸甲酯和脱落酸诱导表达。<b>[结论]</b>不结球白菜<i>BcAKR4C9</i>基因能够被不同激素诱导表达,并且参与到多种逆境胁迫响应。 2018年03月27 00:00 2018年2期 240 247 5621791 张飞雪, 虞章红, 刘坤宇, 文锴, 王建军, 侯喜林, 李英 不同抗性甜瓜接种蔓枯病菌后内源激素含量变化及其相关基因的表达分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802008 <b>[目的]</b>本文旨在研究甜瓜抗感材料中内源激素含量及其相关基因表达量的分析,了解甜瓜抗蔓枯病的抗性机制。<b>[方法]</b>以抗蔓枯病甜瓜抗源PI420145和感蔓枯病甜瓜‘白皮脆’(对照)为材料,在接种蔓枯病菌后的不同时间(0、1、2、3、5、7 d)进行取样,测定内源激素乙烯、茉莉酸及水杨酸的含量,并利用荧光定量PCR技术分析叶片中乙烯、茉莉酸、水杨酸等防御信号途径中相关基因的表达特征。<b>[结果]</b>抗蔓枯病甜瓜材料PI420145叶片中的乙烯含量整体低于感蔓枯病材料‘白皮脆’,但在接种0和7 d时茉莉酸含量均高于‘白皮脆’,并且水杨酸含量也基本高于‘白皮脆’。在接种前期(0~3 d),PI420145叶片中乙烯途径相关基因<i>ACS、EIN2</i>的表达量显著高于‘白皮脆’,接种后期(5~7 d)<i>ACS</i>在PI420145中下调表达并且表达量显著低于‘白皮脆’。PI420145叶片中茉莉酸途径相关基因<i>COI1、PDF1.2</i>的表达量分别在接种后期和接种前期基本显著高于‘白皮脆’,而<i>AOS</i>表达量在接种后期则极显著低于‘白皮脆’。在PI420145叶片中除接种后1 d外,水杨酸途径相关基因<i>EDS5</i>的表达量均显著高于‘白皮脆’,而<i>ICS、NPR1</i>的表达量分别在接种后期和接种前期基本显著高于‘白皮脆’。<b>[结论]</b>PI420145叶片中低浓度的乙烯以及高浓度的茉莉酸和水杨酸提高了其对蔓枯病的抗病能力,PI420145叶片中<i>EIN2、PDF1.2、EDS5</i>和<i>NPR1</i>在接种早期的高表达促使其比‘白皮脆’更早一步对蔓枯病菌的侵染作出反应。 2018年03月27 00:00 2018年2期 248 255 1317267 鲁秀梅, 张宁, 夏美玲, 钱春桃, 陈劲枫 铜胁迫下葡萄植株的生理响应和铜转运蛋白基因<i>VvCTR1</i>的克隆及分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802009 <b>[目的]</b>本文旨在研究重金属铜对葡萄植物生长发育的影响,为揭示重金属铜对植物的伤害机制提供理论依据。<b>[方法]</b>采用过量的硫酸铜以及硫酸铜与其螯合剂混合液处理葡萄植株幼苗,以Hoagland溶液为对照,分析根和叶片的发育情况,叶绿素含量以及铜在植株中的分布情况;克隆了铜转运蛋白基因<i>VvCTR1</i>,分析其在果实发育过程中的表达量,并对其结构特征和物种间的同源性进行分析,同时分析铜胁迫下葡萄根、茎和叶中的<i>VvCTR1</i>表达情况。<b>[结果]</b>与对照相比,过量的硫酸铜、硫酸铜与柠檬酸或EDTA混合处理可以抑制葡萄植株新根的发育数量和长度,促进叶片叶绿素的降解和落叶速率,增加叶柄基部乙烯的产生以及多聚半乳糖醛酸酶和纤维素酶活性,尤其以硫酸铜和EDTA混合处理伤害更明显。Cu<sup>2+</sup>在植株叶、茎、根中的含量从小到大分别依次为上部叶片、中部叶片、下部叶片,上部茎、中部茎、下部茎,老根、幼根;硫酸铜处理植株中的Cu<sup>2+</sup>含量高于对照,并且随着处理时间的延长含量不断升高,尤其是硫酸铜与柠檬酸或者EDTA混合处理植株中Cu<sup>2+</sup>含量更高。克隆的铜转运蛋白基因<i>VvCTR1</i>中无内含子,其编码的蛋白含有3个跨膜区TMD1~3,N端含有1个甲硫氨酸富含区。<i>VvCTR1</i>基因的表达量随着果实发育逐渐降低。无论在根中还是在不同部位的茎和叶中,<i>VvCTR1</i>都能被铜诱导。<b>[结论]</b>过量的铜会对葡萄植株造成伤害,尤其与Cu<sup>2+</sup>的螯合剂柠檬酸或EDTA同时存在时,能使更多的Cu<sup>2+</sup>进入植物体内,最终引起葡萄植株死亡。 2018年03月27 00:00 2018年2期 256 265 4457912 刘众杰, 李傲, 崔梦杰, 许瀛之, 上官凌飞, 贾海锋, 王晨, 房经贵 多花型园林小菊品质评价与品种筛选 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802010 <b>[目的]</b>本文旨在建立多花型园林小菊品种的评价体系,开展品种观赏品质、生长特性和适应性的观测与综合评价,为品种筛选和新品种引进提供可靠的依据。<b>[方法]</b>连续2年通过田间观察统计,对69个多花型园林小菊品种主要品质性状数据进行分析,应用专家咨询法、层次分析法和<i>K</i>-Means聚类法建立评价体系。<b>[结果]</b>对69个多花型园林小菊品种综合评价的结果为:优级品种12个,占17.39%;良级品种16个,占31.88%;中级品种19个,占33.33%;差级品种12个,占17.39%。12个优级多花型园林小菊品种分别为‘钟山金阳’‘钟山光辉’‘钟山赤焰’‘钟山早白’‘钟山银桂’‘钟山敷粉’‘钟山紫瑞’‘钟山樱桂’‘钟山紫鹃’‘钟山紫松果’‘钟山紫辰’‘钟山紫日’。冠丛圆整性、花朵繁密度、花朵数量、花色持久度、花期长度、植株紧凑性、缺株数等是多花型园林小菊品种的重要品质评价指标。<b>[结论]</b>层次分析法可有效地应用于多花型园林小菊综合评价和品种筛选。 2018年03月27 00:00 2018年2期 266 274 1960398 朱德宁, 韩宇, 房伟民, 陈发棣, 陈素梅, 邓波, 管志勇 切花菊叶片的遗传多样性分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802011 <b>[目的]</b>在形态学水平上研究切花菊叶片的遗传多样性。<b>[方法]</b>对189个切花菊品种的12个叶部性状进行观测和统计,包括性状的分布分析、性状在品种内的稳定性和品种间的差异性分析以及主成分分析。<b>[结果]</b>叶长、叶宽、叶长/叶宽、顶生裂片相对于叶的长度、最低位一级裂刻深度和叶上表面绿色程度的数量性状符合正态分布。质量性状在品种群内的分布都不均匀。叶长、叶宽、叶柄相对于叶的长度、叶柄与茎的夹角、叶上表面绿色程度和叶基部形状,这6个性状同时符合品种内稳定性好和品种间差异明显的要求。对叶部形态影响最大的性状主要是顶生裂片相对于叶的长度、最低位一级裂刻深度、叶边缘锯齿数量和叶基部形状。叶部性状综合得分较高的品种有‘南农凯歌’‘南农朱雀’‘南农单金翠’‘南农紫庐’‘南农金焰’‘南农粉葵’‘欧元黄’和‘南农凯悦’等。<b>[结论]</b>切花菊叶片具有丰富的遗传多样性,顶生裂片相对于叶的长度、最低位一级裂刻深度、叶边缘锯齿数量和叶基部形状是引起切花菊叶部形态差异的主要原因。 2018年03月27 00:00 2018年2期 275 285 2523188 沈凤, 蒋逍逍, 房伟民, 管志勇, 邓波, 陈发棣 LAMP快速诊断由拟轮枝镰孢引起的水稻恶苗病 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802012 <b>[目的]</b>水稻恶苗病是为害水稻生长发育的重要病害,在我国的分布非常广泛,经常会造成严重的损失。拟轮枝镰孢是引起水稻恶苗病的重要病原菌,本研究意在建立由拟轮枝镰孢引起的水稻恶苗病的快速诊断技术。<b>[方法]</b>基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以拟轮枝镰孢(<i>Fusarium verticillioides</i>)的3-磷酸甘油酸激酶(3-phosphoglyceric phosphokinase)基因<i>Pgk</i>为靶标,设计筛选LAMP特异性引物。<b>[结果]</b>建立了可直接从水稻恶苗病植株中检测拟轮枝镰孢并诊断由该病原菌引起的水稻恶苗病的LAMP检测技术(<i>FvPgk</i>-LAMP)。该检测技术可以从田间发病的水稻植株中直接对病原菌进行检测,反应条件为62℃、70 min。由于反应前在反应管内加入了羟基萘酚蓝(HNB),反应结束后可对结果进行直接判定,阳性反应呈天蓝色,阴性反应则仍然为紫色。该体系的最低检出限为目标菌纯DNA的100 pg·μL<sup>-1</sup>。应用该技术我们已成功且快速地对来自江苏南京和镇江的水稻恶苗病样本进行了病害诊断。<b>[结论]</b>本研究为拟轮枝镰孢引起的水稻恶苗病的诊断提供了快速且有效的新技术。 2018年03月27 00:00 2018年2期 286 292 1645369 曾丹丹, 戎振洋, 袁咏天, 王晓莉, 郑小波 马铃薯甲虫烟碱型乙酰胆碱受体α5亚基基因的克隆及其表达模式分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802013 <b>[目的]</b>烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)在昆虫中枢神经系统兴奋性神经递质突触传导过程中起重要作用,也是新烟碱类杀虫剂的作用靶标。马铃薯甲虫(<i>Leptinotarsa decemlineata</i>)是重要的检疫性马铃薯食叶害虫。根据报道已鉴定得到该虫10个nAChR亚基,本研究的目的是进一步完善该虫nAChR亚基的组成和其表达模式。<b>[方法]</b>依据马铃薯甲虫基因组数据,利用PCR和RACE技术对马铃薯甲虫的nAChR亚基基因进行克隆,通过相似性和系统发育树分析验证该基因的亲缘关系。利用实时定量PCR技术检测该基因在马铃薯甲虫各个发育阶段及成虫头、胸、腹和吡虫啉及噻虫嗪处理的4龄幼虫和成虫的表达水平。<b>[结果]</b>克隆获得了该虫又1个nAChR α亚基基因的全长cDNA,将其命名为<i>Ldα5</i>(GenBank登录号为MF197919)。实时定量PCR结果表明:<i>Ldα5</i>在马铃薯甲虫各个发育阶段及成虫头、胸、腹中都有不同程度的表达量,其中在1龄幼虫和成虫头部的表达量最高;吡虫啉和噻虫嗪处理对<i>Ldα5</i>的表达量有不同影响,在幼虫中,吡虫啉导致<i>Ldα5</i>明显下调,而噻虫嗪无明显影响,在成虫中2种药剂的处理都可明显提高<i>Ldα5</i>的表达量。<b>[结论]</b>本研究结果为明确马铃薯甲虫nAChR亚基的生理功能及该虫对新烟碱类杀虫剂的抗性机制等研究奠定了基础。 2018年03月27 00:00 2018年2期 293 301 2647239 解林杰, 李莎, 姜卫华 取食干旱胁迫小麦对黏虫及其寄生性斑痣悬茧蜂生长发育的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802014 <b>[目的]</b>本研究旨在探究取食干旱胁迫下小麦的黏虫及其幼虫寄生性斑痣悬茧蜂的生长发育表现。<b>[方法]</b>采用聚乙二醇(PEG6000)模拟干旱条件,设置不同干旱胁迫水平(0、0.05、0.10和0.20 g·mL<sup>-1</sup> PEG6000)处理盆栽小麦造成生理性干旱,然后接黏虫初孵幼虫于叶上取食直至成虫羽化,观察其生活史和形态特征;并以3龄幼虫为寄主供斑痣悬茧蜂寄生,观察寄生蜂生活史和形态特征。<b>[结果]</b>干旱胁迫小麦对黏虫的发育历期、存活率、蛹体鲜质量、成虫体干质量等有显著影响。与对照相比,高水平干旱胁迫(0.20 g·mL<sup>-1</sup> PEG6000)下黏虫幼虫的发育历期延长4.60%,存活率降低21.00%,蛹体鲜质量下降11.76%,成虫体干质量减小33.33%。干旱胁迫处理对斑痣悬茧蜂子代蜂的卵+幼虫发育历期、茧鲜质量和雌成虫后足胫节长度具有显著影响。低水平干旱胁迫(0.05 g·mL<sup>-1</sup> PEG6000)下显著延长斑痣悬茧蜂子代蜂幼虫的发育历期,从对照的9.55 d延长至10.15 d,但高水平干旱处理的发育历期与对照无显著差异;与对照相比,高水平干旱胁迫处理的蜂茧鲜质量下降0.31 mg,雌成虫后足胫节长度缩短近0.04 mm,而低水平干旱处理与对照无显著差异。<b>[结论]</b>干旱胁迫小麦对取食叶片的黏虫生长发育具有不利影响,并通过黏虫幼虫寄主对斑痣悬茧蜂子代蜂的生长发育产生间接负面影响。 2018年03月27 00:00 2018年2期 302 307 1151056 侯佳丽, 李保平, 孟玲 基于RNA-Seq的拟南芥不定芽再生过程的基因表达谱分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802015 <b>[目的]</b>本研究旨在分析拟南芥愈伤组织形成和不定芽再生2个阶段基因的差异表达情况,探究不定芽再生背后的相关基因调控机制。<b>[方法]</b>采用拟南芥不定芽再生两步培养法培养根外植体,利用RNA-Seq高通量测序技术分别对愈伤组织诱导培养基(CIM)培养0 d根外植体(C0)、CIM培养4 d根外植体(C4)、芽诱导培养基(SIM)培养3 d根外植体(S3)进行基因测序,利用软件分析基因表达情况。<b>[结果]</b>将C4的基因表达量和C0进行比对,共检测到4 332个差异表达基因,其中1 399个基因表达上调,2 933个基因表达下调;在不定芽再生阶段(S3与C4的基因表达量进行比对)检测到2 910个差异表达的基因,其中2 231个基因表达上调,679个基因表达下调。对差异表达基因进行转录物功能注释分析发现:明显富集的功能分类多与激素合成、代谢等生物过程有关。在愈伤组织形成阶段一些与细胞分裂素分解代谢相关的<i>CKX</i>基因和与生长素活性相关的GH3家族基因表达量明显增加,而与细胞分裂素合成相关的多个基因表达量却明显降低。在不定芽再生阶段与细胞分裂素合成相关基因表达量明显增加,<i>CKX</i>家族部分成员表达量则明显降低。同时,还发现多个转录因子基因表达量在不同阶段发生显著变化,比如AP2/EREBP家族的部分成员。<b>[结论]</b>对拟南芥不定芽再生过程基因表达谱进行检测和对比分析,获得了大量基因表达谱分析数据,为揭示不定芽再生过程的基因调控机制提供了有效的数据和理论依据。 2018年03月27 00:00 2018年2期 308 320 2344116 向亚男<sup>1</sup>, 黄蕊蕊<sup>2</sup>, 顾婷婷<sup>2</sup>, 甘立军<sup>1</sup> 水稻中SAPK8/9/10与OsRbohB/E蛋白互作在ABA诱导H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>产生中的作用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802016 <b>[目的]</b>本文旨在验证水稻中SAPK8/9/10与OsRbohB/E蛋白的互作及其在ABA诱导的H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>产生中的作用。<b>[方法]</b>先采用酵母双杂交系统进行初步的SAPK8/9/10与OsRbohB/E蛋白的互作分析,然后采用双分子荧光互补(BiFC)、GST-pull down和体外磷酸化技术验证其互作。为了进一步探讨SAPKs与OsRbohs在ABA信号转导中的作用,采用水稻原生质体瞬时体系分析ABA处理时SAPKs与OsRbohs对H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>产生的影响。<b>[结果]</b>SAPK8/9/10与OsRbohB和OsRbohE在体内、外存在相互作用,且OsRbohs是SAPKs磷酸化的底物。与对照组相比,水稻原生质体瞬时过表达<i>SAPK9/10</i>(<i>SAPKs</i>-OE)和<i>OsRbohB/E</i>(<i>OsRbohs</i>-OE)组中H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>的产生明显增加,且ABA处理后增加趋势增强;瞬时沉默<i>SAPKs</i>(ds-<i>SAPKs</i>)和<i>OsRbohs</i>(ds-<i>OsRbohs</i>)组中H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>的产生明显下调,且ABA诱导的H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>增加在这些原生质体中也均被抑制;<i>SAPKs</i>-OE+ds-<i>OsRbohs</i>、ds-<i>SAPKs</i>+<i>OsRbohs</i>-OE组中H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>的产生表现出不同程度的减少。<b>[结论]</b>SAPKs与OsRbohs共同参与调节ABA诱导的H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>的产生。 2018年03月27 00:00 2018年2期 321 329 2505001 宋文敏, 孙嫚嫚, 蒋明义 叶面施肥对烟叶中K和Zn元素的吸收与转运的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802017 <b>[目的]</b>研究缺K或缺Zn烟叶在叶面增施K或Zn肥后,烟叶对K或Zn元素的吸收以及在不同叶位间的转运和分配规律。<b>[方法]</b>采用水培试验,控制不同供K(0、1、2、3、6、12、24和48 mmol·L<sup>-1</sup>)或Zn(0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.77、3.08和6.16 μmol·L<sup>-1</sup>)水平,研究烟叶合适的K或Zn含量及缺素临界值;对缺K或缺Zn烟株的中位叶(倒3叶)施用30 g·L<sup>-1</sup>KNO<sub>3</sub>或3 g·L<sup>-1</sup> ZnSO<sub>4</sub>溶液,分别于处理后0、0.04、0.17、0.5、1、2、4、7、14和21 d取样,测定中位叶及上位叶、下位叶的干质量和元素含量。利用扫描电子显微镜(SEM)与能谱分析(EDS)测定3个部位叶片主叶脉或叶柄不同组织K、Zn的相对含量。<b>[结果]</b>营养液供K水平低于4 mmol·L<sup>-1</sup>或供Zn水平小于0.4 μmol·L<sup>-1</sup>时,会明显影响烟株生长;烟叶缺K或缺Zn的临界值分别为11.5%和14.2 mg·kg<sup>-1</sup>。对缺K或缺Zn烟株中部叶片(倒3叶)施用K或Zn肥,K或Zn在不同叶片间的转运速度很快,0.04 d后即转运到上位叶或下位叶;上位叶K含量明显高于下位叶,说明K优先向上位叶转运;而下位叶Zn含量大于上位叶,Zn会大量积累在下位叶。能谱分析表明:K容易向幼嫩的分生组织转运;K可以同时通过韧皮部和木质部向上位叶及下位叶转运,但通过韧皮部转运较多;烟草叶片叶脉内K主要分布于薄壁组织,中位叶施K肥后,上位叶、中位叶、下位叶的近轴表皮、近轴薄壁组织、维管组织、远轴薄壁组织和远轴表皮的K相对含量均增加,薄壁组织增加较多。<b>[结论]</b>叶面施K肥后,K可以同时通过韧皮部和木质部快速向其他缺素叶片转运,K优先向上位叶转运。而叶面施Zn肥后,Zn能快速向上位叶、下位叶转运,且在下位叶有大量的积累。如果烟株严重缺K,建议每隔4 d重复叶面喷施30 g·L<sup>-1</sup> KNO<sub>3</sub>溶液;对于缺Zn烟叶,喷施1次3 g·L<sup>-1</sup>即可起到明显的补Zn效果。 2018年03月27 00:00 2018年2期 330 340 1671199 高舒迪<sup>1</sup>, 杨晨滟<sup>1</sup>, 邓小鹏<sup>2</sup>, 夏妍<sup>1</sup>, 沈振国<sup>1</sup>, 陈亚华<sup>1</sup> 不同土壤改良剂对整治烟田土壤团聚体组成的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802018 <b>[目的]</b>探究不同土壤改良剂对整治烟田土壤(黄壤)团聚体组成的影响,旨在为快速改善烟田土壤物理性质提供依据。<b>[方法]</b>设计常规施肥基础上分别配施石灰、玉米秸秆、玉米秸秆炭、石灰+玉米秸秆、石灰+玉米秸秆炭的田间试验,测定土壤水稳定性团聚体粒径分布、土壤团聚体质量、水稳定性土壤团聚体的贡献率等指标。<b>[结果]</b>常规施肥条件下施用石灰或再配施玉米秸秆有利于减少水稳定性团聚体中较小粒径组分的质量分数,玉米秸秆较玉米秸秆炭更适于配施石灰以降低水稳定性大团聚体中小粒径组分的质量分数。在常规施肥条件下,玉米秸秆较玉米秸秆炭更适于配施石灰以提高土壤团聚体阻碍水的破坏作用的能力。与常规施肥(对照)相比,石灰+玉米秸秆处理水稳定性团聚体的平均质量直径和几何平均直径分别显著提高37%~57%和33%~111%,团聚体分形维数分别降低1.1%和0.8%,显著改善了烟田土壤水稳定性团聚体的粒径分布及其稳定性。石灰、玉米秸秆和玉米秸秆炭等对土壤水稳定性团聚体指标的贡献率表明,石灰在玉米秸秆还田快速整治烟田土壤团聚体组成中起主要作用。<b>[结论]</b>常规施肥条件下配施22.5 t·hm<sup>-2</sup>石灰和15 t·hm<sup>-2</sup>玉米秸秆能够在短期内促进烟田土壤形成较大粒径团聚体,协调土壤团聚体粒径组分并提高团聚体稳定性,达到改良整治烟田土壤物理性质的效果。 2018年03月27 00:00 2018年2期 341 348 1130549 朱经伟<sup>1,2</sup>, 张云贵<sup>2</sup>, 李志宏<sup>2</sup>, 冉传贤<sup>3</sup>, 张恒<sup>1</sup>, 刘青丽<sup>2</sup>, 李雪华<sup>4</sup>, 石俊雄<sup>1</sup> 磁性水滑石的制备、表征及其吸附刚果红的应用研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802019 <b>[目的]</b>采用水热法制备磁性水滑石材料(MNP-LDH),并以该材料作为吸附剂来吸附水体中的刚果红染料,探究其脱附和循环利用性,同时制备磁纳米四氧化三铁(MNP)和水滑石(LDH)作为对照。<b>[方法]</b>采用扫描电子显微镜、透射电子显微镜、红外光谱、比表面积测定仪以及X射线衍射仪对上述材料进行表征;采用静态吸附的方法,以紫外可见分光光度计为检测手段,考察了pH、吸附时间和初始浓度等对材料吸附性能的影响;采用Langmuir吸附等温模型和准二级动力学吸附模型对上述材料进行了热力学和动力学模拟研究;以氢氧化钠为洗脱剂,对MNP-LDH进行了脱附和循环利用性研究。<b>[结果]</b>1)由电子显微镜图谱可以看出:MNP-LDH与MNP均呈规则的球型结构,粒径同为100 nm左右,MNP-LDH形成的孔径较裸露的MNP更小;MNP-LDH与LDH的红外光谱图中400~600 cm<sup>-1</sup>的吸收峰代表Fe-O、Al-O及Mg-O的伸缩振动和弯曲振动,1 300 cm<sup>-1</sup>附近的吸收峰对应C-O的伸缩振动,3 400 cm<sup>-1</sup>左右的峰归属于O-H伸缩振动。X射线衍射光谱图显示:MNP-LDH以及MNP都为Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>晶型,且出现了MNP-LDH的特征峰;MNP-LDH的单点BET比表面积远大于LDH的单点BET比表面积。2)当pH值从2增至4时,材料对水中刚果红的吸附能力随之明显降低,当pH值达到4以后,吸附容量基本保持平衡,且MNP-LDH的吸附容量大于MNP和LDH的吸附容量。3)随着刚果红初始质量浓度增大,MNP-LDH和MNP对刚果红的吸附容量也不断增大,当质量浓度达到100 mg·L<sup>-1</sup>后,材料达到吸附饱和。4)随着超声时间延长,MNP-LDH的吸附容量不断增加,10 min以后,材料对不同初始质量浓度刚果红的吸附都达到平衡。5)MNP-LDH和MNP对刚果红的吸附符合Langmuir等温吸附模型和准二级动力学吸附模型。6)0.1 mol·L<sup>-1</sup>的氢氧化钠可以定量洗脱刚果红,且材料可循环使用4次而脱附率基本没有变化。7)将本材料应用于某工业废水中刚果红的去除分析,待测物的回收率为113%,说明本材料可有效去除实际水样中的刚果红。<b>[结论]</b>在pH2.5,刚果红初始质量浓度为150 mg·L<sup>-1</sup>,超声时间为15 min的条件下,MNP-LDH可以达到最大吸附容量265.96 mg·g<sup>-1</sup>;MNP-LDH具有良好的再生性。 2018年03月27 00:00 2018年2期 349 356 1442541 朱波, 张亚东, 徐江艳, 陈敏, 施瑛, 蒋红梅 甲状腺素对猪卵巢卵泡颗粒细胞类固醇激素合成及增殖的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802020 <b>[目的]</b>本试验旨在探究甲状腺素对猪卵巢卵泡颗粒细胞类固醇激素合成功能以及增殖的影响。<b>[方法]</b>首先采用免疫组化法鉴定甲状腺素受体(TRα/β)在猪卵巢组织的表达情况,随后体外培养猪卵巢原代颗粒细胞,选取低(10<sup>-8</sup> mol·L<sup>-1</sup>)、中(10<sup>-7</sup> mol·L<sup>-1</sup>)、高(10<sup>-6</sup> mol·L<sup>-1</sup>)3种浓度的甲状腺素(T4)孵育24 h,采用酶联免疫法检测细胞培养液中孕酮(P4)和雌二醇(E2)水平,并采用蛋白印迹法检测颗粒细胞内激素合成相关酶蛋白(3β-HSD、CYP19)的表达情况。采用MTT法检测各浓度甲状腺素对细胞活力的影响,利用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光染色验证不同浓度甲状腺素对颗粒细胞增殖的影响。<b>[结果]</b>免疫组化结果显示:TRα/β在猪卵巢不同发育阶段卵泡的颗粒细胞、膜细胞中有广泛表达,在卵母细胞的胞质中也有分布,在闭锁卵泡中也见明显表达。猪卵巢原代颗粒细胞经甲状腺素处理后,细胞培养液中的孕酮和雌激素水平都显著低于空白对照组(<i>P</i>&lt;0.05),并且各剂量处理组间孕酮呈现出剂量依赖性降低趋势;雌激素在低浓度和高浓度甲状腺素处理组较中浓度处理组高。蛋白免疫印迹结果显示:与对照组相比,3β-HSD和CYP19蛋白在较高浓度甲状腺素(10<sup>-7</sup>和10<sup>-6</sup> mol·L<sup>-1</sup>)处理组的表达量均显著降低(<i>P</i>&lt;0.05);而在低浓度甲状腺素(10<sup>-8</sup> mol·L<sup>-1</sup>)处理组,CYP19蛋白表达量显著降低(<i>P</i>&lt;0.05),但3β-HSD蛋白表达无显著差异。此外,MTT细胞毒性和增殖试剂盒检测结果显示:不同浓度甲状腺素处理并不影响细胞活力,这与PCNA免疫荧光强度统计结果一致,进一步证实了甲状腺素对原代颗粒细胞增殖没有影响。<b>[结论]</b>甲状腺素能够作用于卵巢颗粒细胞,干扰类固醇激素的合成,其作用机制可能是通过改变激素合成相关蛋白3β-HSD和CYP19的表达来完成的。而甲状腺素对颗粒细胞激素合成的干扰效应并不影响细胞增殖状态。 2018年03月27 00:00 2018年2期 357 363 1809600 宋丹<sup>1</sup>, 吴国云<sup>1</sup>, 丁威<sup>2</sup>, 邢军<sup>1,2</sup>, 魏全伟<sup>1</sup>, 石放雄<sup>1</sup> 明胶对鸡胚盘细胞的增殖和多功能性的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802021 <b>[目的]</b>本试验旨在解决鸡胚盘细胞(cBC)不易贴壁的问题及应用E8培养基建立新的鸡胚盘细胞培养体系。<b>[方法]</b>在E8培养基基础上,应用10 g·L<sup>-1</sup>明胶和人重组玻连蛋白(hVTN)包被培养板,对比其在促进鸡胚盘细胞贴壁速度、促进增殖和维持多功能性方面的差异。<b>[结果]</b>使用10 g·L<sup>-1</sup>明胶包被培养板后,鸡胚盘细胞12 h内即可迅速贴壁。10 g·L<sup>-1</sup>明胶处理组中5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)阳性细胞率显著高于对照组(<i>P</i>&lt;0.01),并且能够抑制凋亡基因<i>P21、Fas</i>的mRNA表达(<i>P</i>&lt;0.05),进而促进细胞增殖,并且能够促进多功能基因<i>Nanog、PouV</i>的表达来维持cBC的多功能性。<b>[结论]</b>10 g·L<sup>-1</sup>明胶可以作为一种新的包被试剂来进行cBC的培养,与人重组玻连蛋白相比,明胶体现了更高的性价比,具有较高的应用价值。 2018年03月27 00:00 2018年2期 364 369 2326592 李荣阳<sup>1</sup>, 唐小川<sup>2</sup>, 徐世永<sup>3</sup>, 陈清<sup>3</sup>, 吴望军<sup>1</sup>, 刘红林<sup>1</sup> 诱导耐药沙门菌CRISPR检测及<i>cas</i>基因表达分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802022 <b>[目的]</b>通过对诱导耐药沙门菌成簇间隔的短回文重复序列(CRISPR)比对分析,以及<i>cas</i>(CRISPR associated)mRNA表达水平的变化,探讨CRISPR/Cas与沙门菌耐药性的关系。<b>[方法]</b>对鼠伤寒沙门菌ATCC13311进行耐药诱导分别获得3株体外诱导耐药(环丙沙星、庆大霉素、氨苄西林)菌和1株体内诱导耐药(环丙沙星)菌,设计引物对CRISPR,进行PCR扩增并检测,应用CRISPR Finder分析CRISPR序列,对5株沙门菌的CRISPR序列进行比对;利用RT-qPCR检测耐药前后沙门菌<i>cas1、cas6、casA</i> mRNA表达水平的变化。<b>[结果]</b>成功扩增出2段CRISPR序列(CRISPR1、CRISPR2),耐药菌碱基的突变均发生在前导区和序列末端;CRISPR1序列的突变发生在前导区的1~4 bp和序列末端的1 136~1 144 bp区域内;CRISPR2序列的突变发生在前导区的1~14 bp和序列末端的780~796 bp区域内;重复间隔序列保守且发现有重复序列的退化现象(degeneration repeats,DRs),同时耐药菌<i>cas1、cas6、casA</i> mRNA的表达水平下降。<b>[结论]</b>提示:沙门菌CRISPR序列突变和<i>cas</i> mRNA表达水平下降与其耐药性有关。 2018年03月27 00:00 2018年2期 370 376 1790222 王磊, 赵霞, 王文静, 张瑞良, 代兴杨, 曾明华, 李琳 鸡饲料中氢溴酸常山酮含量的反相HPLC检测方法的建立 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802023 <b>[目的]</b>本文旨在建立检测饲料中氢溴酸常山酮含量的固相萃取-反相高效液相色谱法。<b>[方法]</b>在鸡饲料中添加一定浓度氢溴酸常山酮,经100 g·L<sup>-1</sup>碳酸钠溶液碱化后用乙酸乙酯提取饲料中氢溴酸常山酮,0.125 mol·L<sup>-1</sup>乙酸铵缓冲液萃取,HLB柱净化后供HPLC测定。流动相为体积比5:3:12的乙腈、0.25 mol·L<sup>-1</sup>乙酸铵缓冲液、水溶液(冰乙酸调pH4.3),检测波长243 nm。<b>[结果]</b>该方法对鸡饲料中氢溴酸常山酮的检测限为0.05 μg·g<sup>-1</sup>,定量限为0.2 μg·g<sup>-1</sup>。在0.2~15 μg·g<sup>-1</sup>范围内,线性关系良好,其相关系数大于0.999,在0.2、1.0、5.0和15.0 μg·g<sup>-1</sup>添加水平下,鸡饲料中氢溴酸常山酮的回收率为87%~113%,日内变异系数为1.1%~17%,日间变异系数为7.1%~12%。<b>[结论]</b>该方法具有良好的线性关系和较高的精密度、回收率,可以简便、灵敏、快速地检测鸡饲料中氢溴酸常山酮含量。 2018年03月27 00:00 2018年2期 377 381 1188876 吴虎虎, 彭麟, 季辉, 刘晓晓, 滕佩, 江善祥 连续施用生物有机肥对草地生物量及土壤微生物区系的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201802024 <b>[目的]</b>本文旨在明确施用生物有机肥对草地生产力的提升效果,从地下部角度分析并阐明草地生产力提高的微生物生态学机制,为构建高产草地土壤的微生物区系提供理论支撑。<b>[方法]</b>在呼伦贝尔地区采用原位定位试验(连续2年施肥)比较了不同施肥方式(不施肥、普通有机肥和生物有机肥)对草地生物量的影响,并采用高通量测序的方法测定了土壤微生物区系的变化。<b>[结果]</b>与不施肥(CK)或者普通有机肥(OF,9 000 kg·hm<sup>-2</sup>)相比,施用生物有机肥(BOF,9 000 kg·hm<sup>-2</sup>)可以显著提高草地地上部生物量。非量度多尺度(NMDS)分析表明不同施肥处理间(CK、OF和BOF)土壤细菌群落结构差异不明显,而真菌群落结构差异显著。施用生物有机肥显著增加了<i>Archaeorhizomyces</i>和木霉属(<i>Trichoderma</i>)的相对丰度,而显著降低了<i>Ophiosphaerella</i>的相对丰度。同时,土壤理化性质和微生物属的相关关系表明,土壤有效磷含量与<i>Archaeorhizomyces</i>和木霉属的相对丰度呈显著正相关,而与<i>Ophiosphaerella</i>呈显著负相关。因此,增加土壤有效磷含量有利于提高草地地上部生物量。<b>[结论]</b>连续施用生物有机肥可以通过调节土壤微生物群落结构和组成来达到提高草地生物量的目的。 2018年03月27 00:00 2018年2期 382 388 1408116 张风革<sup>1</sup>, 霍云倩<sup>1</sup>, 孙艺<sup>2</sup>, 肖燕<sup>1</sup>, 杨高文<sup>1</sup>, 张英俊<sup>1,3</sup>