南京农业大学学报 /oa 封面 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20170500 2017年09月20 00:00 2017年5期 0 0 806413 目录 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705000 2017年09月20 00:00 2017年5期 0 0 789669 植物蔗糖合酶生理功能研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705001 蔗糖合酶(sucrose synthase)是植物糖代谢过程的关键酶,催化蔗糖的合成与分解,在淀粉和纤维素的合成、果实品质的形成、固氮的建立、生殖生长以及糖信号转导等过程中发挥了重要的调控作用。为系统地认识蔗糖合酶及其在植物生命活动中的重要作用,本文概括地介绍了植物蔗糖合酶在结构与定位、生理功能、分子特征、合成与分解活性动态变化以及遗传改良等方面的研究进展,并展望了植物蔗糖合酶的研究趋势,以期为蔗糖合酶的研究提供参考。 2017年09月20 00:00 2017年5期 759 768 1941880 房经贵, 朱旭东, 贾海锋, 王晨 昆虫瞬时感受器电位(TRP)通道研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705002 瞬时感受器电位(transient receptor potential,TRP)通道是一类位于细胞膜上的阳离子通道。TRP通道基因最先在研究视觉缺陷的突变体黑腹果蝇中被发现,因其受光刺激仅产生瞬时电生理信号而得名。此后基于序列同源性,在不同动物、酵母和藻类中均有发现,在果蝇中共鉴定得到13个基因,并划分为7个亚家族(TRPC、TRPA、TRPM、TRPV、TRPN、TRPP和TRPML)。TRP通道家族基因在昆虫体内扮演着调控各种生理与行为的重要角色,参与调控昆虫各种感觉的发生,例如视觉、嗅觉、听觉、温度感知以及机械刺激感觉等。近年来的研究表明,TRP家族中TRPV亚家族成员<i>nanchung和inactive</i>基因所编码的蛋白复合物是杀虫剂吡蚜酮的分子靶标。本文分别介绍了TRP通道家族的命名、分类、结构、进化与激活机制等,并结合最新的文献进展对其参与昆虫各种生理与行为功能的研究进行了详细评述。 2017年09月20 00:00 2017年5期 769 779 1513354 高聪芬, 牛春东, 王利祥, 魏琪, 吴顺凡 水稻胚乳突变体<i>b140</i>的表型分析及基因克隆 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705003 <b>[目的]</b>对水稻粉质胚乳突变体<i>b140</i>进行表型分析和基因克隆,为阐明水稻淀粉合成机制奠定基础。<b>[方法]</b>以粳稻品种‘W017’为野生型,测量‘W017’和突变体<i>b140</i>的农艺性状,分析籽粒的灌浆期干物质积累量和理化性质,并观察淀粉颗粒的结构;构建<i>b140</i>与‘南京11’的F<sub>2</sub>群体,取隐性极端个体定位基因;利用qRT-PCR测定籽粒灌浆时期的淀粉合成相关基因表达量;测定相关淀粉合成酶活性。<b>[结果]</b><i>b140</i>表现为粉质胚乳,粒宽、粒厚和千粒质量均显著低于野生型,但粒长和其他农艺性状无显著变化。<i>b140</i>种子的总淀粉和直链淀粉含量均显著低于野生型,而可溶性糖含量显著高于野生型。扫描电镜观察<i>b140</i>胚乳淀粉粒呈球形或不规则形状,排列疏松。突变基因定位在第1号染色体短臂56 kb的区间内,测序发现只有1个已知基因<i>Os01g0179400</i>发生突变。qRT-PCR结果显示,与野生型相比,<i>b140</i>胚乳中淀粉合成相关基因的表达量出现不同程度的下调。<i>b140</i>胚乳中腺苷磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的活性显著低于野生型。<b>[结论]</b><i>b140</i>由于<i>Os01g0179400</i>基因发生突变,导致粉质胚乳表型。<i>Os01g0179400</i>突变影响了淀粉合成相关基因的表达以及腺苷磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的活性。<i>b140</i>的发现对于了解水稻淀粉合成和调控的机制具有一定的意义。 2017年09月20 00:00 2017年5期 780 788 2547594 汪国湘, 蔡跃, 尤小满, 燕海刚, 王亮, 金洁, 张文伟, 江玲 冬小麦灌浆期旗叶对光密度与春化方式的光合响应 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705004 <b>[目的]</b>本文旨在探讨人工可控环境中满足灌浆期冬小麦生长发育的适宜光密度。<b>[方法]</b>以小麦品种‘扬麦16’为试验材料,自然光照+自然春化为对照(CK),设置人工光照(650 μmol·m<sup>-2</sup>·s<sup>-1</sup>)+自然春化(T1)、人工光照(500 μmol·m<sup>-2</sup>·s<sup>-1</sup>)+自然春化(T2)、人工光照(650 μmol·m<sup>-2</sup>·s<sup>-1</sup>)+种芽春化(T3)、人工光照(500 μmol·m<sup>-2</sup>·s<sup>-1</sup>)+种芽春化(T4)4个组合处理,研究了冬小麦灌浆期旗叶对光密度与春化方式的光合响应。<b>[结果]</b>T1、T2、T3和T4处理的千粒质量、旗叶<i>P</i><sub>n</sub>相对增率(<i>V</i><sub>Pn</sub>)和蒸腾速率均大于CK;T3、T4的光合潜能(<i>P</i><sub>max</sub>)高于T1、T2和CK;T1的光饱和点高于T2,T3高于T4;T2的光补偿点和暗呼吸速率均低于T1,T4低于T3;T1的气孔导度高于T2,T3高于T4;T3、T4的旗叶气孔导度高于T1和T2。CK及T1、T2、T3、T4处理的千粒质量分别为33.58、47.67、44.42、49.66、46.31 g。<b>[结论]</b>500~650 μmol·m<sup>-2</sup>·s<sup>-1</sup>是人工可控环境中灌浆期‘扬麦16’生长发育的适宜光密度参数。 2017年09月20 00:00 2017年5期 789 794 1071601 肖海<sup>1</sup>, 刘海俊<sup>2</sup>, 柳伟哲<sup>1</sup>, 舒国平<sup>1</sup>, 焦学磊<sup>1</sup>, 刘晓英<sup>1</sup>, 徐志刚<sup>1</sup> 基于<i>matK</i>基因和ITS序列的江苏地方豆类植物的亲缘关系研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705005 <b>[目的]</b>为探究江苏地方豆类植物之间的亲缘关系,从分子水平上对14种豆科植物进行了深入分析,旨在为后续豆类植物的种质创新和遗传改良提供理论依据。<b>[方法]</b>对14种豆类植物的<i>matK</i>基因和ITS序列的扩增片段进行PCR产物直接测序,并结合GenBank数据库中的大豆(<i>Glycine max</i>)、菜豆(<i>Phaseolus vulgaris</i>)、红小豆(<i>Vigna angularis</i>)和绿豆(<i>Vigna radiata</i>)4种豆类植物基因组序列,利用Clustal W、MEGA 6.0、BioEdit软件对这18种材料的<i>matK</i>基因和ITS序列分别进行比对和分析,并以百脉根(<i>Lotus corniculatus</i>)为外类群,分别构建系统进化树并计算分化时间。<b>[结果]</b>18种豆类植物的<i>matK</i>基因序列长度为750 bp,其中变异位点数为85,信息位点数为82,遗传距离的范围为0~0.099。ITS序列长度为795 bp,其中变异位点数为260,信息位点数为242,遗传距离的范围为0~0.292。以百脉根为外类群,用<i>matK</i>基因序列和ITS序列分别构建的进化树显示,18种豆类植物可分为3组,即红小豆和绿豆分为一组,菜豆和大豆分别聚为一组。分化时间结果表明,大豆与菜豆的分化时间为19.02百万年前,菜豆与红小豆的分化时间为13.50百万年前,绿豆与红小豆的分化时间为2.94百万年前。<b>[结论]</b>序列分析和系统进化树的结果与形态学的特征基本一致,表明<i>matK</i>基因和ITS序列可用于豆类植物属间亲缘关系分析。 2017年09月20 00:00 2017年5期 795 803 5533166 王彤<sup>1,2</sup>, 刘静<sup>2</sup>, 郭月<sup>2</sup>, 袁娜<sup>2</sup>, 杜建厂<sup>1,2</sup> 不结球白菜<i>BcOPR3</i>基因的克隆与功能分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705006 <b>[目的]</b>12-氧-植物二烯酸还原酶(12-oxo-phytodienoic acid reductase,OPR)是茉莉酸生物合成途径的关键酶,催化12-氧-植物二烯(OPDA)还原反应生成茉莉酸化合物,广泛参与植物生长过程中的防御系统。本文旨在克隆和研究不结球白菜<i>BcOPR3</i>基因,研究其对信号分子和非生物胁迫应答的影响。<b>[方法]</b>对不结球白菜<i>OPR</i>3基因进行克隆、生物信息分析、亚细胞定位,并对其在霜霉病菌、脱落酸(ABA)、茉莉酸(JA)、水杨酸(SA)、机械伤害、低温和热激胁迫下的表达水平进行了分析。<b>[结果]</b><i>BcOPR3</i>在2个不结球白菜品种中的序列一致,其BcOPR3蛋白与同科油菜(<i>Brassica napus</i>)的同源性高达98%,进化关系与之最相近;亚细胞定位结果显示BcOPR3定位在细胞膜上;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测结果表明,不结球白菜霜霉病菌、ABA、JA、SA、机械伤害、低温和热激胁迫均能诱导<i>BcOPR3</i>基因表达。霜霉病菌侵染下,<i>BcOPR3</i>在抗性自交系‘苏州青’和感病自交系‘矮脚黄’中存在差异表达,并且在抗病自交系中表达量较高。<b>[结论]</b>从不结球白菜克隆得到的<i>BcOPR3</i>,通过表达分析发现,<i>BcOPR3</i>可能存在对非生物胁迫的共响应,且在不结球白菜中该基因是在细胞膜上起作用。在非生物胁迫下,基因具有不同的应答模式,抗性自交系<i>BcOPR3</i>基因的高表达是其具有更高抗性的主要原因。 2017年09月20 00:00 2017年5期 804 811 2141394 文锴, 王远, 胡蝶, 袁敬平, 侯喜林, 李英 不结球白菜<i>BrCDF1</i>的克隆和蛋白亚细胞定位及其与BrFKF1蛋白的互作验证 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705007 <b>[目的]</b>本文旨在揭示<i>CDF1</i>基因在不结球白菜(<i>Brassica rapa</i> ssp.<i>chinensis</i>)抽薹开花过程中的调控机制,验证其是否与FKF1蛋白发生互作。<b>[方法]</b>以‘苏州青’为材料,采用同源克隆方法获得<i>BrCDF1</i>基因全长序列,并与其他物种进行氨基酸序列比对;将<i>BrCDF1</i>与报告基因<i>YFP</i>融合构建亚细胞定位载体pEarlyGate101-<i>BrCDF1-YFP</i>,采用农杆菌介导的方法将其瞬时表达于本氏烟(<i>Nicotiana benthamiana</i>)叶片中;激光共聚焦显微镜观察,利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术验证不结球白菜BrCDF1和BrFKF1蛋白是否存在互作。<b>[结果]</b><i>BrCDF1</i>基因含有876 bp开放阅读框,编码292个氨基酸。与甘蓝型油菜(<i>Brassica napus</i>)、野甘蓝(原变种)(<i>Brassica oleracea</i> var.<i>oleracea</i>)、萝卜(<i>Raphanus sativus</i>)的氨基酸序列比对结果显示:<i>BrCDF1</i>在进化过程中的保守程度分别为91.11%、88.25%、84.76%,保守性较高。BrCDF1蛋白定位于细胞核中,BrCDF1和BrFKF1之间存在相互作用。<b>[结论]</b>BrCDF1定位于细胞核,并且与BrFKF1互作,在进化过程中保守性较高,并可能参与了不结球白菜的光周期开花途径。 2017年09月20 00:00 2017年5期 812 819 1556617 吴小婷<sup>1</sup>, 邵帅旭<sup>1</sup>, 李英<sup>1</sup>, 张昌伟<sup>1</sup>, 侯喜林<sup>1</sup>, 沈振国<sup>2</sup>, 刘同坤<sup>1</sup> 菊花<i>Cm14-3-3v</i>基因的克隆及表达分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705008 <b>[目的]</b>本文旨在克隆菊花‘神马’<i>Cm14-3-3v</i>基因,并初步分析其表达特征,为其功能研究奠定基础。<b>[方法]</b>从菊花‘优香’转录组库中获得编码拟南芥同源基因<i>14-3-3v</i>序列信息,根据NCBI比对确定基因的cDNA全长并进行克隆,再利用生物信息学方法对该蛋白的功能和活性位点进行预测,同时利用实时定量PCR分析了在非生物胁迫条件下该基因的表达变化。<b>[结果]</b><i>Cm14-3-3v</i>的ORF序列长774 bp,编码257个氨基酸;亚细胞定位表明Cm14-3-3<i>v</i>定位在细胞质和细胞核;生物信息学分析表明该蛋白有19个Ser、7个Thr和7个Tyr潜在的磷酸化位点,在N-端有5个蛋白结合区;表达模式分析显示,<i>Cm14-3-3v</i>基因在根、茎、叶、花中均有表达,且受脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、盐和冷胁迫的诱导表达。<b>[结论]</b>本文克隆得到菊花<i>Cm14-3-3v</i>基因,表达模式分析表明其受ABA、MeJA、盐和冷胁迫诱导表达。 2017年09月20 00:00 2017年5期 820 826 1749724 曹沛沛, 毛雅超, 刘涛, 陈发棣, 房伟民, 陈素梅, 蒋甲福 昆虫病原线虫共生菌<i>Serratia nematodiphila</i> DR186对果蝇致病机制的研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705009 <b>[目的]</b>通过昆虫病原线虫共生菌<i>Serratia nematodiphila</i> DR186侵染黑腹果蝇的野生型和免疫突变体,研究该共生菌侵染果蝇成虫的致病机制。<b>[方法]</b>利用饲喂和针刺方式将<i>S.nematodiphila</i> DR186接入野生型黑腹果蝇和其体液免疫途径突变体的肠道和血腔中引起侵染;通过统计2种侵染条件下各个突变体的存活率,血腔中共生菌的菌体数,结合荧光定量PCR检测两类抗菌肽Diptericin和Drosomycin的表达水平来研究<i>S.nematodiphila</i> DR186对果蝇的致病机制。<b>[结果]</b><i>S.nematodiphila</i> DR186对野生型黑腹果蝇的肠道侵染存活率在7 d降至0,血腔侵染存活率在19 h降至0;<i>S.nematodiphila</i> DR186血腔侵染后,Imd途径的<i>PGRP-LC、Dredd、Relish</i>突变体相对Toll途径的<i>Dif</i>突变体和野生型更加敏感,在12 h内存活率低于50%,并在随后短时间内全部死亡。荧光定量PCR分析显示Diptericin和Drosomycin的相对表达水平在血腔侵染过程中均呈先上升再逐渐降低的趋势。Dredd突变体Drosomycin相对表达量在6 h达到88%,<i>Dif</i>突变体和野生型的Diptericin相对表达量在6 h分别达到75%和62%。<i>S.nematodiphila</i> DR186侵染肠道后对Imd途径和Toll途径突变体及野生型的存活率在7 d降至0。针刺法侵染的致病性高于饲喂法侵染,在19 h存活率降至0。<b>[结论]</b><i>S.nematodiphila</i> DR186可能采用免疫逃逸机制从果蝇肠道成功侵染果蝇。果蝇抵抗<i>S.nematodiphila</i> DR186侵染的主要免疫途径是Imd体液免疫途径。 2017年09月20 00:00 2017年5期 827 834 1360123 徐漫, 蔡翰林, 张克云 耿氏假硬草种子萌发条件的研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705010 <b>[目的]</b>明确耿氏假硬草(<i>Pseudosclerochloa kengiana</i>)的休眠特性以及温度、光照、pH、水势、盐分和埋土深度对其种子萌发和出苗的影响。<b>[方法]</b>采用培养皿法和盆钵法进行种子萌发和出苗试验,测定萌发率并计算种子萌发指数、种子平均萌发时间等指标。<b>[结果]</b>耿氏假硬草具有1个月以上的休眠期,5 cm土下层积和低温水储有利于种子休眠的解除;种子萌发最适温度为15~20℃;耿氏假硬草萌发过程不需要光照刺激,且不同光照周期对种子萌发没有明显影响;在pH值4~10内均可萌发,且不同pH值之间种子萌发没有显著性差异;对水势不敏感,当水势大于-0.6 MPa时其萌发率才有明显下降;具有较高的耐盐性,当NaCl达到160 mmol·L<sup>-1</sup>高浓度时,其萌发率仍高达83%;种子在土表0.5 cm以上时出苗不受影响,当埋种深度大于2 cm时,已基本不能出苗。<b>[结论]</b>确定了耿氏假硬草具有1个月以上的休眠期且土下层积和低温水储可解除种子休眠;同时明确了温度、水势、盐分及埋土深度对种子的萌发具有一定的影响,而光照和pH对种子萌发没有影响。 2017年09月20 00:00 2017年5期 835 841 1183141 高海涛, 吴希宝, 于佳星, 张伟, 董立尧 几株溶磷细菌的筛选和鉴定及其溶磷效果 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705011 <b>[目的]</b>本研究旨在利用微生物活化土壤中的磷素,提高植物磷素吸收效率,促进植物生长。<b>[方法]</b>采用蒙金娜固体平板从不同类型的土壤中分离筛选溶磷效果较好的细菌菌株,通过形态学观察、理化特性检测和16S rRNA基因序列分析对菌株进行鉴定,摇瓶试验比较研究其溶解Ca<sub>3</sub>(PO<sub>4</sub>)<sub>2</sub>及氟磷灰石的能力,并采用定性的方法检测其产生IAA及铁载体的能力,盆栽试验探索其对大豆促生的潜能。<b>[结果]</b>从土壤中分离获得7株溶磷细菌san5、san6、san8、DLT2、DLT3、DLT4、DK6。菌株san8和DLT4对Ca<sub>3</sub>(PO<sub>4</sub>)<sub>2</sub>、氟磷灰石的溶解效率明显优于其他菌株。各菌株分泌有机酸种类和数量差异较大,且多数菌株能分泌草酸、苹果酸、丙二酸、乙酸。菌株san5、san6、san8、DLT3和DK6产吲哚乙酸(IAA),菌株san6、DLT3和DLT4产铁载体。初步鉴定菌株san5、san8和DK6为<i>Enterobacter</i> sp.,菌株san6和DLT2为<i>Pantoea</i> sp.,菌株DLT3和DLT4为<i>Acinetobacter</i> sp.。盆栽试验发现,接种单一溶磷菌及多株复合菌处理均可促进大豆生长,增加土壤速效磷含量,但3株复合菌处理的溶磷促生效果显著高于单一菌株。<b>[结论]</b>溶磷菌能将土壤中难溶性磷酸盐转化为植物能吸收利用的可溶性磷,从而提高土壤中有效磷含量,促进植株生长发育,并且复合菌的溶磷促生效果显著高于单一菌株。 2017年09月20 00:00 2017年5期 842 849 1796118 冯哲叶, 陈莎莎, 王文超, 杨华, 邓照亮, 李真, 王世梅, 徐阳春 Bacillomycin D突变体在生物膜形成中的转录组分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705012 <b>[目的]</b>植物促生细菌的根际生物膜形成过程是其功能发挥的关键因素,本研究利用转录组技术遴选参与这一过程的相关基因。<b>[方法]</b>利用转录组技术分析解淀粉芽孢杆菌SQR9的突变体SQR9M1和野生型SQR9生物膜形成24 h时基因的表达差异,并用定量Real-time PCR验证;通过电感耦合等离子质谱(ICP-MS)的方法比较突变体SQR9M1和野生型SQR9的胞内铁离子浓度的差异;细胞培养板结合定量PCR监测外源添加铁离子后对突变体SQR9M1生物膜形成表型和相关基因表达的影响。<b>[结果]</b>突变体SQR9M1的生物膜形成能力在培养前期(24 h)显著低于野生型SQR9。与野生型相比,突变体生物膜细胞中共有1 261个基因表达发生改变,其中574个基因上调(<i>P</i>&lt;0.01),687个基因下调(<i>P</i>&lt;0.01)。功能明确的变化基因约占全部差异基因数量的70%,变化最大的基因功能类群是无机离子转运和代谢。突变体SQR9M1的生物膜形成延迟现象与其铁离子转运能力受损有关,外源添加铁离子能诱导野生型SQR9和突变体SQR9M1生物膜的形成和相关基因的表达。<b>[结论]</b>突变体SQR9M1铁离子ABC转运蛋白FhuBGC、FeuABC和YfmCDEF相关基因显著下调,其胞内铁离子浓度在生长前期显著低于野生型,外源添加铁离子后能恢复突变体的生物膜表型。 2017年09月20 00:00 2017年5期 850 858 1564514 徐志辉<sup>1</sup>, 张慧慧<sup>1</sup>, 张钰婷<sup>1</sup>, 冯元韬<sup>1</sup>, 张馨玉<sup>1</sup>, 仇美华<sup>2</sup> 四种大型湿地植物对水产养殖废水中矿质元素和重金属富集特征的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705013 <b>[目的]</b>从湿地中采收不同的水生植物,并进行植物元素测定,分析其富集矿质营养和重金属的动态过程,探索和鉴定利用水生植物混生种植进行生物修复的可行性。<b>[方法]</b>以淡水养殖试验基地为试验地点,在不同季节采集该基地潜流湿地大型湿地植物美人蕉(<i>Canna indica</i>)、鸢尾(<i>Iris tectorum</i>)、芦苇(<i>Phragmites australis</i>)和再力花(<i>Thalia dealbata</i>)的地上部,分析其生长、矿质营养、重金属元素积累。<b>[结果]</b>寒冬过去后,芦苇的生长恢复最快,其生物量明显高于其他3种植物,而美人蕉恢复最慢。随着夏季和秋季的来临,4种植物均明显生长,尤其是美人蕉,其次是再力花。4种植物对氮素的富集能力都很强,此外,美人蕉对磷、钾、镁、锌、铜、钠等的富集能力特别强,而鸢尾对磷、钙、镁等富集能力比较强,芦苇对硫、铁、铝、铬、镉、铅等富集能力很强,再力花对硫、锰的富集能力较强。<b>[结论]</b>美人蕉对水产养殖废水中诸多元素的总积累要明显强于鸢尾、芦苇和再力花,其次是芦苇。在淡水养殖基地,混生的美人蕉、鸢尾、芦苇和再力花对不同元素富集具有明显的互补性,混合种植从而进行污水修复是可行的。 2017年09月20 00:00 2017年5期 859 866 1495527 刘冉<sup>1</sup>, 甘淳丹<sup>1</sup>, 赵海燕<sup>1</sup>, 陆诗敏<sup>2</sup>, 吴昊<sup>3</sup>, 梁永红<sup>4</sup>, 郑青松<sup>1</sup>, 刘兴国<sup>2</sup> 诱导条件下不同配施钙肥处理减缓‘黄冠梨’果面褐斑病的研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705014 <b>[目的]</b>探究不同配施钙肥处理对‘黄冠梨’果实品质、果皮抗氧化性及矿质养分含量的影响,为减缓‘黄冠梨’果面褐斑病的发生提供理论依据。<b>[方法]</b>以14年生‘黄冠梨’树为试材,在幼果期及幼果期+膨大期开展了叶面单施螯合钙肥(Ca)及钙与硅肥(Ca+Si)、钙与甲壳素氨基葡萄糖盐酸盐(Ca+D)、钙与羧甲基纤维素钠(Ca+CMC)配施试验,以喷施清水为对照,结合采后诱导处理,测定影响‘黄冠梨’果面褐斑病发生的相关指标。<b>[结果]</b>在发病果实和未发病果实中,与对照相比,诱导条件下不同配施钙肥处理均显著提高果皮过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低多酚氧化酶(PPO)活性,且幼果期+膨大期施用的效果优于幼果期喷施。幼果期和膨大期施用Ca+D处理显著提高了果皮的相关抗氧化酶活性,可使发病果果皮POD、SOD活性分别提高26.98%和69.33%,PPO活性降低16.61%;不同配施钙肥处理均提高果皮钙含量,降低钾、镁、磷含量。在发病果实中,幼果期+膨大期施用Ca及Ca+D处理果实,钙含量分别提高23.67%和23.14%,钾含量分别降低9.52%和16.02%,幼果期与膨大期施用Ca+D处理果实,镁含量与对照相比降低13.19%。诱导条件下不同配施钙肥处理有效降低‘黄冠梨’果皮褐变指数,其中幼果期+膨大期施用Ca+D处理效果最为显著,与对照相比果面褐斑病发生率显著降低81.82%。<b>[结论]</b>Ca+D处理可以提高果皮抗氧化能力,有效减缓诱导条件下果面褐斑病的发生。 2017年09月20 00:00 2017年5期 867 873 1279983 刘娜, 金昕, 谢昶琰, 徐阳春, 董彩霞 大肠杆菌表达的RNA解螺旋酶Ded1p的提纯与解螺旋机制 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705015 <b>[目的]</b>表达、提纯DExH/D-box家族蛋白Ded1p,并综合传统电泳以及单分子荧光共振能量转移(smFRET)技术,探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。<b>[方法]</b>原核表达、纯化出全长的Ded1p作为研究蛋白,并验证其解螺旋酶活性。以荧光对标记的带有3’末端单链RNA尾巴的13 bp双链RNA作为研究底物,基于全内反射的单分子荧光共振能量转移技术,在自制的样品通道内添加800 nmol·L<sup>-1</sup> Ded1p、2 mmol·L<sup>-1</sup> ATP/Mg<sup>2+</sup>以及研究底物进行解螺旋试验,再用自编的Matlab程序采集和分析数据,进而从单分子层面探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。<b>[结果]</b>首次通过Ni-NTA凝胶亲和层析与Capto-DEAE凝胶阴离子交换层析两步纯化手段,得到了大量纯净的、并且具有双链RNA解螺旋酶活性的Ded1p。Ded1p的smFRET试验在单分子层面实现了对Ded1p打开13 bp双链RNA过程的实时观察。通过分析FRET的变化过程,首次提出Ded1p主要以一步解螺旋的方式打开双链RNA结构。<b>[结论]</b>原核表达、纯化的Ded1p具有RNA解螺旋酶活性;该Ded1p是以局部双链打开的模式解开RNA双链。 2017年09月20 00:00 2017年5期 874 880 1519086 赵富林, 徐明飞, 谢青云, 单衍可, 雷静, 施志玉, 孙海凤, 刘斐 重组嗜酸乳杆菌S层蛋白拮抗H<sub>9</sub>N<sub>2</sub>禽流感病毒对树突状细胞侵袭的研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705016 <b>[目的]</b>乳酸杆菌S层蛋白可结合树突状细胞特异性细胞间黏附分子3捕获的非整合蛋白(DC-SIGN)受体调节树突状细胞的成熟和分化,禽流感病毒同样可以通过与DC-SIGN的结合促进病毒在人源树突状细胞内的复制。为了探究S层蛋白是否竞争性与DC-SIGN结合,进而拮抗禽流感病毒侵袭树突状细胞,本试验构建表达嗜酸乳杆菌ATCC4356 S层蛋白的重组大肠杆菌,并探究重组S层蛋白抑制H<sub>9</sub>N<sub>2</sub>禽流感病毒侵袭树突状细胞的影响。<b>[方法]</b>以嗜酸乳杆菌ATCC4356的基因组为模板扩增S层蛋白基因并携带GST标签,构建重组质粒pGEX-4t-2-S并转化<i>E.coli</i> Rosetta-gami2(DE3),18℃低温诱导重组S层蛋白的表达,提取S层蛋白后经亲和层析进一步纯化;用纯化的重组S层蛋白提前作用于小鼠和鸡骨髓源树突状细胞,随后感染H<sub>9</sub>N<sub>2</sub>禽流感病毒,检测S层蛋白对禽流感病毒感染的拮抗作用。<b>[结果]</b>电泳结果显示成功扩增出1 295 bp的带有同源臂的嗜酸乳杆菌ATCC4356 S层蛋白基因;酶切得到2条带,分别为载体骨架4 951 bp,目的基因1 263 bp,表示成功构建pGEX-4t-2-S质粒,并且测序结果正确;电泳结果显示转化子中带有S层蛋白的基因,表明构建的质粒成功转入到DE3中并成功表达;电泳结果显示在相对分子质量70×10<sup>3</sup>处有1条带,灰度分析表明亲和层析纯化后得到了纯度为95%的重组S层蛋白,产量为每10<sup>11</sup> CFU大肠杆菌11.9 mg;流式细胞检测结果证明S层蛋白能够使入侵小鼠和鸡树突状细胞中的H<sub>9</sub>N<sub>2</sub>病毒量减少25%~30%,实时荧光定量PCR结果表明<i>HA、NA、NP和PB1</i>基因的相对表达水平均达20%以上。<b>[结论]</b>重组大肠杆菌Rosetta-gami2(DE3)表达的S层蛋白能够有效地拮抗H<sub>9</sub>N<sub>2</sub>亚型禽流感病毒对小鼠和鸡树突状细胞的侵袭,为预防禽流感疫病提供新思路。 2017年09月20 00:00 2017年5期 881 887 1334474 高雪, 朱立麒, 栗云云, 吴海琴, 朱怡蕾, 庾庆华 三氯卡班诱导小鼠乳腺上皮细胞癌变的研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705017 <b>[目的]</b>广谱抗菌剂三氯卡班(TCC)在各种环境介质和生物体中被频繁检出。为了研究TCC对动物的危害,观察了TCC对正常小鼠乳腺上皮细胞(EpH4-Ev)的急慢性损伤作用,评价其对乳腺上皮细胞的诱癌作用,为防止TCC在动物用品中的滥用提供理论依据。<b>[方法]</b>采用MTT法确定TCC的最佳工作浓度后,作用于EpH4-Ev细胞,以48 h为1个药物作用循环,分别作用3和6个循环(命名为T3和T6细胞)后,使用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,Western blot法测定细胞内磷酸化组蛋白(p-H2AX)的蛋白表达量,软琼脂克隆试验检测细胞非停泊性生长能力,细胞划痕试验测定细胞迁移能力,用此指标作为检测TCC引起细胞癌变的指标。<b>[结果]</b>EpH4-Ev细胞在0.195 μmol·L<sup>-1</sup>TCC作用下,细胞活性最大,故0.195 μmol·L<sup>-1</sup>为TCC的工作浓度;T3和T6细胞的细胞增殖水平、ROS水平、p-H2AX蛋白表达量及软琼脂上的细胞集落个数均显著高于细胞对照;T6细胞的细胞划痕之间的距离显著小于细胞对照。<b>[结论]</b>TCC能够诱导正常的EpH4-Ev细胞发生癌变。 2017年09月20 00:00 2017年5期 888 893 1322127 施金彤<sup>1</sup>, 韩开顺<sup>2</sup>, 明珂<sup>1</sup>, 陈云<sup>1</sup>, 杜红旭<sup>1</sup>, 胡元亮<sup>1</sup>, 王德云<sup>1</sup>, 武毅<sup>1</sup>, 刘家国<sup>1</sup> 鸡组织中硫酸头孢喹肟的残留检测——高效液相色谱法 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705018 <b>[目的]</b>为了检测鸡组织中硫酸头孢喹肟的残留,建立了测定鸡组织中硫酸头孢喹肟残留的高效液相色谱法(HPLC)。<b>[方法]</b>取皮脂、肌肉、肝脏、肾脏4种组织匀浆,按照体积比20:1的比例分别添加硫酸头孢喹肟标准品,制成的生物样品经乙腈-水(体积比为1:11)提取,正己烷去脂,固相萃取柱富集净化,收集洗脱液在50℃水浴条件下N<sub>2</sub>吹干后复溶,在C<sub>18</sub>色谱柱上进行分离,紫外检测器(270 nm)下检测。以甲酸调节的pH3.0左右的乙腈-水溶液(体积比为1:10)作为流动相。<b>[结果]</b>该方法测得硫酸头孢喹肟在皮脂、肌肉、肝脏、肾脏等组织中的检测限均为0.01 μg·g<sup>-1</sup>,定量限均为0.02 μg·g<sup>-1</sup>;各个组织在0.02~2.00 μg·g<sup>-1</sup>范围内线性关系良好,相关系数(<i>R</i><sup>2</sup>)均大于0.99;添加高、中、低(2.00、0.20、0.02 μg·g<sup>-1</sup>)含量的硫酸头孢喹肟后,其在皮脂、肌肉、肝脏、肾脏中的平均回收率分别为89.46%、88.85%、89.90%、85.98%;日内变异系数0.86%~11.8%,日间变异系数2.44%~11.13%,均符合添加回收率和变异系数的规定;含有药物的生物样品在常温、4℃及-20℃保存48 h条件下均不降解,稳定性好;在匀浆组织中添加与硫酸头孢喹肟结构及性质相近的4种药物(阿莫西林、甲氧苄啶、氨苄西林、磺胺嘧啶),均不会干扰硫酸头孢喹肟的检测。<b>[结论]</b>建立的检测鸡组织中硫酸头孢喹肟残留的HPLC法精确度高,准确性和重现性好,符合残留检测的要求。 2017年09月20 00:00 2017年5期 894 900 1550934 李巧宁<sup>1</sup>, 赵婕<sup>1</sup>, 刘爱玲<sup>2</sup>, 孟小宾<sup>2</sup>, 鲍恩东<sup>1,2</sup> 去甲肾上腺素对大肠杆菌耐药质粒接合转移的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705019 <b>[目的]</b>本研究旨在探讨生产中普遍存在的急性应激因素对细菌耐药基因水平转移的可能影响。<b>[方法]</b>选取分离自断奶香猪粪便的2株喹诺酮类敏感型大肠杆菌作为试验菌株,通过测定<i>D</i><sub>600</sub>值比较菌株在添加不同浓度去甲肾上腺素培养液中的生长曲线,确定去甲肾上腺素对于大肠杆菌的最佳促生长浓度;分离自断奶香猪粪便的7株携带质粒喹诺酮类耐药基因(<i>aac</i>(<i>6</i>’)-<i>lb-cr、oqxAB、qnrS</i>)的大肠杆菌,采用滤膜接合法,计算去甲肾上腺素诱导和未诱导的大肠杆菌分离株(供体菌)与大肠杆菌J53(受体菌)的接合转移率;PCR检测接合子及供、受体菌质粒介导抗性基因的携带情况;采用K-B纸片扩散法和琼脂稀释法测定接合子及供、受体菌的多种抗生素最小抑菌浓度(MIC)。<b>[结果]</b>去甲肾上腺素对于大肠杆菌的促生长效果具有浓度依赖性,最佳促生长浓度为100 μmol·L<sup>-1</sup>。7株携带质粒介导的喹诺酮类耐药基因的大肠杆菌中有4株(A、B、C、D)成功获得接合子,经去甲肾上腺素(100 μmol·L<sup>-1</sup>)诱导后与受体菌的接合转移率与去甲肾上腺素未诱导组相比均升高,其中A、B、C 3株供体菌极显著升高(<i>P</i>&lt;0.01)。所有接合子均扩增到恩诺沙星3种耐药基因:<i>aac</i>(<i>6</i>’)-<i>lb-cr、oqxAB、qnrS</i>。接合子菌株对6种抗菌药物的MIC值与大部分供体菌株相同。<b>[结论]</b>去甲肾上腺素对于大肠杆菌的促生长效果具有浓度依赖性,且提高了大肠杆菌分离株耐药质粒体外接合转移率。提示:动物养殖生产中应加强应激管理,以减少细菌耐药基因水平传播的发生。 2017年09月20 00:00 2017年5期 901 908 1483466 翁梦薇, 计徐, 郑卫江, 姚文 高产与低产蛋鸡卵巢和卵泡及相关基因的表达差异 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705020 <b>[目的]</b>以东乡绿壳蛋鸡为研究对象,从形态学和分子水平上探究高低产蛋鸡卵巢和卵泡的差异。<b>[方法]</b>选择高产组、低产组东乡绿壳蛋鸡各10只,采集静脉血,测定相关激素含量;屠宰采集卵巢组织,制作组织切片,观察卵巢形态结构;提取卵巢组织RNA,分别测定高产与低产蛋鸡卵巢中的细胞增殖凋亡基因、生殖调控相关转录因子基因、类固醇激素合成关键酶基因和相关激素受体基因的表达量。<b>[结果]</b>高产与低产蛋鸡卵巢和卵泡在形态上有明显差别:高产蛋鸡卵巢体积大,卵泡丰富,细胞排列紧密;低产蛋鸡卵巢、卵泡发育不良,细胞松散。高产蛋鸡血清中促卵泡激素(FSH)、孕酮和雌二醇水平均显著高于低产蛋鸡(<i>P</i>&lt;0.05)。实时定量PCR检测结果显示:在高产蛋鸡中翼状螺旋/叉头转录因子2(<i>FOXL2</i>)、转录因子GATA家族4基因(<i>GATA4</i>)和B淋巴细胞瘤2基因(<i>Bcl2</i>)表达显著上调(<i>P</i>&lt;0.05),且在高产蛋鸡卵巢中激活素受体1(<i>ACVR1</i>)和增殖细胞核抗原基因(<i>PCNA</i>)表达量极显著高于低产蛋鸡(<i>P</i>&lt;0.01),但细胞色素P450家族11A1基因(<i>CYP11A1</i>)表达量显著低于低产组(<i>P</i>&lt;0.05)。<b>[结论]</b>血清中生殖激素含量以及<i>FOXL2、GATA4、Bcl2、ACVR1、PCNA</i>和<i>CYP11A1</i>基因表达的差异是影响鸡产蛋性能高低的重要因素。 2017年09月20 00:00 2017年5期 909 914 1994977 李佳宜, 陆应林, 刘小凡, 虞德兵 两株发酵乳杆菌体外抗氧化活性研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705021 <b>[目的]</b>本文旨在研究分离自金华火腿中发酵乳杆菌Y4和Y41的体外抗氧化活性。<b>[方法]</b>分别制备发酵乳杆菌的无细胞提取物、发酵上清液和菌悬液,以维生素C为阳性对照,通过测定1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、羟自由基(·OH)清除率、超氧阴离子自由基(O<span style="TEXT-DECORATION: overline"><sup>·</sup></span><sub>2</sub>)清除率和氧自由基清除活性来评价2株发酵乳杆菌Y4、Y41的自由基清除能力,并通过测定抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性探讨发酵乳杆菌的抗氧化机制。<b>[结果]</b>2株发酵乳杆菌的无细胞提取物具有较强的O<span style="TEXT-DECORATION: overline"><sup>·</sup></span><sub>2</sub>清除率和氧自由基清除能力,发酵上清液和菌悬液分别具有较强的DPPH自由基清除率和·OH清除率。菌株Y41的羟自由基及氧自由基清除能力均显著高于Y4(<i>P</i>&lt;0.05),其DPPH自由基清除率显著低于Y4;菌株Y41无细胞提取物O<span style="TEXT-DECORATION: overline"><sup>·</sup></span><sub>2</sub>清除率显著高于Y4,但发酵上清液清除率显著低于Y4。此外,2株菌株无细胞提取物中均检测到具有SOD和GSH-Px活性。<b>[结论]</b>2株发酵乳杆菌都具有较高的抗氧化活性,其中菌株Y41的抗氧化能力更强,其中无细胞提取物具有更高的氧自由基清除能力和SOD活性。 2017年09月20 00:00 2017年5期 915 920 1008494 蒋雨鹤, 康大成, 周光宏, 张万刚 基于Kinect的母猪呼吸频率测定算法 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705022 <b>[目的]</b>呼吸频率是评价母猪健康的重要指标。针对目前畜牧业对母猪呼吸频率无接触测定的需求,提出一种基于Kinect的无接触测量算法。<b>[方法]</b>使用Kinect采集梅山母猪侧卧时的深度图像。通过动态区域检测算法确定腹部区域,采用DBSCAN密度聚类算法得到腹部区域质心进行局部深度图像提取。最后基于腹部区域局部深度图像的深度均值,使用离散傅里叶变换得到深度-时间拟合曲线,通过极值点确定1次呼吸过程的周期进而求出监测时间段内母猪的呼吸频次,最后转化成母猪的呼吸频率(RF)。<b>[结果]</b>将检测结果与人工计数结果做比较,呼吸频率正确率为85.3%,该呼吸频率测定算法是有效的。<b>[结论]</b>提出了一种呼吸频率测定方法,该方法实现无接触测量,准确率高,为定位饲养条件下的梅山母猪呼吸频率的测定提供了理论支撑。 2017年09月20 00:00 2017年5期 921 927 2433437 陶源栋, 沈明霞, 刘龙申, 陆明洲, 许佩全, 施宏 串联式混合动力拖拉机驱动系统设计匹配与牵引试验 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705023 <b>[目的]</b>为了提高串联式混合动力电动拖拉机的动力性,设计了一种后轮轮毂电机独立的驱动系统。<b>[方法]</b>通过理论分析探讨了各驱动部件的参数设计与匹配方法,提出以犁耕工况下的牵引力、牵引效率及运输工况下的爬坡度、最大载质量作为该驱动系统的动力性能评价指标,并搭建试验台进行测试。<b>[结果]</b>分析可知:该串联式混合动力驱动系统在纯电动驱动模式下可提供的最大牵引力为8 775.1 N,牵引效率为0.82~0.86,最大爬坡度可达40.2%,在坡度为0、4%、8%、12%的路面行驶可承受的最大载质量分别为9 088.2、5 408.8、3 569.1、2 465.3 kg;在混合动力驱动模式下可提供的最大牵引力可达8 115.2 N,牵引效率为0.60~0.85,最大爬坡度可达37.3%,在坡度为0、4%、8%、12%的路面行驶可承受的最大载质量分别为8 516.0、5 027.4、3 283.1、2 236.4 kg。<b>[结论]</b>该驱动系统在两种驱动模式下均可满足较大耕深的犁耕作业要求,适应较大坡度的大载质量运输要求。 2017年09月20 00:00 2017年5期 928 935 1394645 鲁植雄, 侯辛奋, 邓晓亭 玉米性别决定基因<i>TS2</i>的表达模式分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705024 <b>[目的]</b> <i>TS2</i>(<i>tasselseed2</i>)是玉米性别决定中的一个关键基因,国内外对其进行了多方面的研究,但其生理学功能至今仍然不清楚。本研究通过<i>TS2</i>基因的表达模式来阐明<i>TS2</i>的表达受什么信号物质刺激,从而推测<i>TS2</i>通过何种生理过程或信号转导途径来实现其在玉米性别决定中的作用。<b>[方法]</b>以玉米自交系B73苗期的叶片、茎尖、根,性别分化时期的穗位叶、雄蕊,开花期的雌蕊、节间、气生根、花丝为试验材料,在V3期(3叶1心期)喷施100 μmol·L<sup>-1</sup>的GA、NAA、ABA、ACC、JA和2.5 mmol·L<sup>-1</sup>的SA溶液(含0.01% Tween-20),分别于激素处理后0、6、12、24、48、72 h时剪取第3叶中段为样本,采用荧光定量PCR测定<i>TS2</i>受激素诱导的表达量。<b>[结果]</b><i>TS2</i>基因在已检测的各组织中都有一定量的表达。在叶片中<i>TS2</i>的表达从苗期到开花期逐渐增加,V8期(8叶1心期)叶片内的<i>TS2</i>表达量达到最高峰,以后逐渐下降。苗期(V1~V7)(1叶1心期到7叶1心期)茎尖中<i>TS2</i>的表达量一直很低,但到V8期,植株茎尖开始性别分化时,<i>TS2</i>的表达量迅速提高20多倍。雄穗、雌穗内<i>TS2</i>的表达量高于叶片或其他营养器官。植物激素GA、SA、NAA抑制<i>TS2</i>的表达,ABA、ACC、JA促进<i>TS2</i>的表达,但以JA对<i>TS2</i>的表达影响最大,JA处理后24 h,<i>TS2</i>的表达量提高了84倍。<b>[结论]</b>植物性别决定基因<i>TS2</i>的表达主要受植物生殖发育过程和植物激素茉莉酸信号的调控,预示着<i>TS2</i>的生理功能与植株体内茉莉酸信号转导途径密切相关。 2017年09月20 00:00 2017年5期 936 940 1034257 杨松青, 安立昆, 严远鑫 UV-B辐射增强对粳稻剑叶光系统Ⅱ的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201705025 <b>[目的]</b>本文旨在研究光系统Ⅱ的叶绿素快速荧光诱导动力学曲线(OJIP曲线)和参数的变化特征,分析UV-B辐射的增强对剑叶光化学活性的影响。<b>[方法]</b>以北方粳稻品种‘沈农265’为试验材料,采用盆栽试验,对照组CK采用自然光照射,处理组T1、T2分别在自然光照基础上增加UV-B辐射1.05和2.10 W·m<sup>-2</sup>,每个处理重复3~6次。选取粳稻幼苗移栽于无孔实验桶中,紫外灯照射时间为08:00-16:00,阴雨天不进行UV-B处理,直至成熟收获。<b>[结果]</b>随着UV-B辐射强度的增加,PSⅡ反应中心供体侧上各个生长时期O-J-I-P曲线上的P相降低,受体侧参数除诱导曲线初始斜率(<i>M</i><sub>o</sub>)呈增加趋势,其他参数均降低;UV-B辐射增加对PSⅡ反应中心能量分配有显著影响,在剑叶各生长期单位反应面积的比活性参数均呈现降低趋势,说明UV-B辐射对其起到抑制作用,导致单位反应中心的比活性参数增强;剑叶各生长期的<i>F</i><sub>v</sub>/<i>F</i><sub>m</sub>、<i>qP、rETR</i>均减小,T2对<i>F</i><sub>v</sub>/<i>F</i><sub>m</sub>、<i>qP、rETR</i>的抑制作用大于T1;剑叶各生长时期的性能指数均降低,且在孕穗期降幅最大,各个时期T2对<i>PIabs</i>的抑制程度大于T1。<b>[结论]</b>UV-B辐射的增强降低了粳稻剑叶各生长期单位面积上吸收的光能、热耗散、捕获的光能、电子传递的量子产额以及活性反应中心的数量,促进了单位反应中心的各项比活性参数的增长,但UV-B辐射的增强也导致剑叶在各个生长期原初光能转换效率、光化猝灭系数、光合电子传递相对速率及性能指数(以吸收光能为基础)的降低。 2017年09月20 00:00 2017年5期 941 948 1430483 战莘晔<sup>1,2</sup>, 殷红<sup>1</sup>, 史洪杰<sup>3</sup>, 王一<sup>4</sup>, 吕晓<sup>5</sup>, 黄珊<sup>6</sup>, 金丽颖<sup>2</sup>