南京农业大学学报 /oa 封面 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20190600 2019年11月15 00:00 2019年6期 0 0 3218055 目录 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906000 2019年11月15 00:00 2019年6期 0 0 823114 梅种质资源与分子生物学研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906001 梅起源于我国,具有丰富的种质资源和遗传多样性。国家级种质资源圃的建立提高了梅种质资源的保存与鉴定水平,同时梅基因组测序的完成也促进了近年来梅分子生物学研究。本文重点综述了梅的起源与分布、资源收集与鉴定评价、核基因组与叶绿体基因组研究、雌蕊发育机制、自交不亲和机制、季节性休眠机制、分子标记、组织培养及遗传转化等方面的研究进展,探讨了梅种质资源研究和分子生物学研究中存在的问题,并指出了今后的重点研究方向。 2019年11月15 00:00 2019年6期 975 985 2111893 高志红, 侍婷, 倪照君, 潘振朋, 倪晓鹏 植物寄生线虫效应子研究进展 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906002 植物寄生线虫是一类专性活体寄生物,每年给全世界农业生产造成极大的损失,其中根结线虫和孢囊线虫分布广、为害重,是最具经济重要性的2大类群。植物寄生线虫诱导植物细胞转化为特异性的取食位点,从中摄取营养以维持线虫的发育和繁殖,效应子被认为在线虫建立和维持寄生过程中发挥着重要的作用。本文从分泌器官、降解和修饰细胞壁、建立取食位点、抑制植物防卫反应以及激活植物免疫系统等方面介绍了植物寄生线虫效应子的相关研究进展,同时讨论了当前研究中存在的问题并对未来的研究方向进行了展望。 2019年11月15 00:00 2019年6期 986 995 1996037 王暄, 秦鑫, 李红梅, 于家荣 通过RNAi技术下调<i>OsLOX</i>提高水稻种子耐储性 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906003 <b>[目的]</b> 本文旨在通过RNAi技术下调<i>OsLOX</i>提高水稻种子耐储性,增强其在老化处理后的种子活力。<b>[方法]</b> 利用RNA干扰(RNAi)技术,下调水稻品种‘宁粳1号’脂氧合酶基因(<i>LOX</i>)的表达,对转基因后代进行多年分子鉴定及生理生化特征和农艺性状考察。<b>[结果]</b> 获得了稳定含有目的片段且不含潮霉素基因的2个改良家系XO3和XO6,与‘宁粳1号’相比,改良系中<i>OsLOX2</i>和<i>OsLOX3</i>表达量显著降低;经10个月自然放置和7 d人工老化处理,改良系脂氧合酶和丙二醛含量均显著低于受体亲本‘宁粳1号’,其脂氧合酶含量为0.094~0.111 ng·mL<sup>-1</sup>、丙二醛含量低于4 nmol·mg<sup>-1</sup>,而‘宁粳1号’分别为0.115 ng·mL<sup>-1</sup>和6 nmol·mg<sup>-1</sup>;老化后‘宁粳1号’发芽率只有31%,而改良系发芽率在70%以上;TTC染色后还原得到的2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTCH)含量和发芽速率也表明改良系的种子活力显著提高;老化后,改良系的种子淀粉含量和胶稠度变化幅度小于‘宁粳1号’。此外,改良系的分蘖数和有效穗数明显增加但结实率降低。<b>[结论]</b> 通过RNA干扰技术降低‘宁粳1号’中<i>OsLOX2</i>和<i>OsLOX3</i>基因的表达,提高了‘宁粳1号’的耐储性,为耐储藏水稻分子育种提供材料基础。 2019年11月15 00:00 2019年6期 996 1005 2518017 张平, 伍洪铭, 张福鳞, 曹鹏辉, 蔡梦颖, 宋炜涵, 刘世家, 江玲 外源虾青素对分蘖期受淹水稻的补救效应 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906004 <b>[目的]</b> 本研究旨在探究淹水胁迫解除后,叶面喷施虾青素(astaxanthin,ASTA)对分蘖期受淹水稻的补救效应。<b>[方法]</b> 以常规粳稻‘宁粳7号’为试验材料,盆栽种植,移栽10 d后进行没顶淹水5 d的处理,淹没结束后设5个处理:正常水分管理(用CT表示);淹水胁迫+解除淹水后喷施清水(CK);淹水胁迫+解除淹水后喷施0.4 mmol·L<sup>-1</sup>虾青素(ASTA-0.4);淹水胁迫+解除淹水后喷施0.8 mmol·L<sup>-1</sup>虾青素(ASTA-0.8);淹水胁迫+解除淹水后喷施1.6 mmol·L<sup>-1</sup>虾青素(ASTA-1.6)。在叶面喷施后0(喷施当天)、1、2、3、5、7 d取样,测定水稻光合色素含量、抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽还原酶(GR)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)]活性、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢(H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>)含量和可溶性蛋白含量等指标;在叶面喷施后0(喷施当天)、3、6、9 d取样测定植株干物质量、株高和可溶性总糖含量;在成熟期收获有代表性的3盆测定产量及其构成因素。<b>[结果]</b> 没顶淹水5 d后,与CT相比,水稻茎蘖数和绿叶数显著减少,干物质积累量和叶绿素含量降低,氧化损伤严重,导致产量下降。淹水解除后,与CK相比,叶面喷施虾青素能提高受淹水稻叶片中抗氧化酶活性,增加可溶性总糖和可溶性蛋白含量,降低H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>和MDA含量,减轻氧化损伤,促进分蘖发生,加快干物质积累,减少产量损失。其中,叶面喷施后12 d,ASTA-0.8处理的茎蘖数、绿叶数以及干物质量、叶绿素a、可溶性总糖和可溶性蛋白含量均明显增加,抗氧化酶活性提高,叶片中H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>和MDA含量降低;喷施后7 d,ASTA-0.8处理叶片中MDA含量与CK相比显著降低20.7%,H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>含量降低9.4%;ASTA-0.8处理最终产量为CT产量的98.7%。<b>[结论]</b> 叶面喷施0.8 mmol·L<sup>-1</sup>虾青素可最大程度补救水稻分蘖期淹水导致的伤害和产量损失。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1006 1013 1707815 徐霞, 钟秋怡, 何彬, 张震, 王绍华, 丁艳锋, 李刚华 不结球白菜<i>BcSERK1</i>基因的克隆及表达分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906005 <b>[目的]</b> 本文旨在研究不结球白菜<i>BcSERK1</i>基因及其在胚胎发生中的作用。<b>[方法]</b> 采用同源克隆的方法从不结球白菜‘二桩白’中克隆到<i>BcSERK1</i>基因全长序列,利用生物信息学分析其结构特征,并与其他物种进行氨基酸序列比对和进化分析,同时利用基因枪介导的方法进行亚细胞定位;利用小孢子培养技术研究不结球白菜‘二桩白’和‘四九菜心’小孢子培养出胚情况;采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)分析<i>BcSERK1</i>基因在2个品种不同组织和在小孢子胚胎发生早期的表达特征。<b>[结果]</b> <i>BcSERK1</i>含有1个1 878 bp开放阅读框,编码625个氨基酸。与其他物种的氨基酸序列比对和系统进化分析结果显示:BcSERK1在进化过程中保守程度较高,与甘蓝型油菜亲缘关系最近。亚细胞定位结果显示:BcSERK1蛋白定位于细胞膜上。游离小孢子培养结果显示:‘二桩白’出胚率较高,每蕾6.67个胚,而‘四九菜心’不出胚。RT-qPCR结果表明:<i>BcSERK1</i>在2个品种不同组织中均有表达,除根外‘四九菜心’的组织中其表达量均低于‘二桩白’;在小孢子胚胎发生早期,<i>BcSERK1</i>基因在‘二桩白’不同培养时间的表达量均高于‘四九菜心’。<b>[结论]</b> BcSERK1蛋白在进化过程中保守性较高,定位于细胞膜上;<i>SERK1</i>基因在2个不结球白菜品种中的差异表达表明该基因对胚胎发生具有重要作用。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1014 1021 7747149 张娅, 黄天虹, 张西林, 刘同坤, 侯喜林, 李英 盐碱处理下砧木SA15和SA17对‘美乐’葡萄生长和果实品质的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906006 <b>[目的]</b> 本文旨在评价耐盐碱砧木SA15和SA17对‘美乐’葡萄生长和果实品质的影响。<b>[方法]</b> 以‘美乐’自根树和嫁接树为试材,于葡萄果实转色期开始进行复合盐碱灌溉处理,以正常生长条件为对照,测定其生长参数,Na<sup>+</sup>、K<sup>+</sup>、果实可溶性糖、有机酸、多酚及香气物质含量等品质指标,并对果实香气成分进行主成分分析。<b>[结果]</b> 在盐碱处理下,‘美乐’自根树叶面积和节间直径较对照显著下降,砧木SA15和SA17嫁接树生长参数与对照无显著差异;SA15和SA17对叶片Na<sup>+</sup>含量无显著影响,但显著提高了叶片K<sup>+</sup>/Na<sup>+</sup>比值。在正常生长条件下,SA15显著降低了果实可滴定酸含量,SA17提高了果糖含量;在盐碱处理下,SA15提高了果实可溶性固形物、葡萄糖和果糖含量,降低了滴定酸和酒石酸含量,而SA17则降低了可溶性固形物、葡萄糖、果糖和酒石酸含量。砧木SA15显著提高了盐碱处理下果实花色苷、总酚和黄烷醇含量,SA17提高了正常和盐碱处理下总酚含量。葡萄果实香气成分的主成分分析表明,在正常生长条件下,砧木SA17能显著影响‘美乐’葡萄香气;在盐碱处理下,砧木SA15和SA17对葡萄香气有不同的影响。<b>[结论]</b> 砧木SA15和SA17缓解了盐碱处理对生长的抑制,砧木SA15嫁接有助于提高葡萄在盐碱处理下的果实品质。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1022 1029 1314132 于昕<sup>1</sup>, 赵玉花<sup>2</sup>, 相广庆<sup>1</sup>, 杜远鹏<sup>1</sup>, 姚玉新<sup>1</sup> 无花粉污染百合的杂交育种研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906007 <b>[目的]</b> 本文旨在研究影响无花粉污染百合杂交亲和性的相关因素,为选育无花粉污染百合新品种奠定基础。<b>[方法]</b> 选取无花粉亚洲百合品种‘小小的吻’和‘平凡生活’,不散粉品种‘简单华尔兹’以及花粉团聚状OT百合品种‘耶罗琳’作为母本,以11份百合种质资源为父本,进行常规杂交,研究各个组合的杂交亲和性。通过花粉管荧光显微观察与石蜡切片重点研究了‘小小的吻’为母本的杂交组合杂交亲和性差异的原因。<b>[结果]</b> 父本中,东方百合‘索邦’的花粉萌发率最高(95.30%),LA百合‘莫泽尔’的花粉萌发率最低(6.79%)。33个杂交组合中,以‘小小的吻’作母本的10个杂交组合的平均杂交亲和指数最高,为3.61%,其中‘小小的吻’ב小飞碟’杂交亲和指数最高;以‘平凡的生活’为母本的9个杂交组合的平均杂交亲和指数为0.90%,其中‘平凡生活’ב正直’的杂交亲和指数最高;以‘简单华尔兹’为母本的8个杂交组合的平均杂交亲和指数为0.57%;以‘耶罗琳’为母本的6个杂交组合的杂交亲和指数均为0。所有杂交亲和的杂交组合中,其父本除LA百合‘正直’与川百合外,均为亚洲百合;亚洲百合与亚洲百合之间杂交有亲和性,而亚洲百合与东方百合、OT百合杂交均不亲和。‘小小的吻’部分杂交组合不亲和原因主要是花粉管未到达花柱底端所致;而以‘小小的吻’为母本的杂交亲和的组合中,花粉管均能到达子房,但其胚胎发育存在正常和异常2种情况。<b>[结论]</b> 百合杂交亲和性与父本花粉活力无关,主要与父母本亲缘关系有关,来自同一杂种系列的父母本杂交亲和性较高,亚洲百合‘小小的吻’最适合作为选育无花粉污染百合的母本。受精前生殖障碍是无花粉百合杂交不结实的主要原因。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1030 1039 4256919 吴美娇<sup>1,2</sup>, 张亚明<sup>1</sup>, 王雪倩<sup>1</sup>, 王蓝青<sup>1</sup>, 余佳<sup>1</sup>, 房伟民<sup>1</sup>, 陈发棣<sup>1</sup>, 滕年军<sup>1,2</sup> 弱光导致荷花花芽败育的机制探析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906008 <b>[目的]</b> 本研究旨在探究弱光下荷花花芽败育的成因及相关机制。<b>[方法]</b> 以荷花种藕品种‘霞光染指’‘红盏托珠’和‘雪恋’为材料,从生理、分子遗传学角度分析弱光诱导在荷花花芽败育的成因。<b>[结果]</b> 与对照(全光照)相比,遮阴处理使植物生长受阻,开花量显著下降,花期延迟并缩短;光合特性分析显示,3个品种光补偿点下降,其中‘雪恋’光补偿点最低;弱光下可溶性糖含量下降,且对蔗糖含量影响最大;Tunnel染色结果显示细胞凋亡是弱光引起花芽败育的主要原因。组学数据揭示引起细胞凋亡的重要基因<i>NnSnRK1</i>在弱光及其他胁迫,如水淹胁迫、铜胁迫、热胁迫等,与<i>NnTPS1</i>呈现出相反的表达模式;RT-qPCR表达量分析表明,遮阴处理下,荷花<i>NnTPS1</i>表达量下降,<i>NnSnRK1</i>表达量上升;外源施加低浓度蔗糖可以提高<i>NnTPS1</i>基因表达量。<b>[结论]</b> 荷花在遮阴处理的弱光环境下,发生严重的花芽败育现象,而细胞程序性死亡是弱光引起花芽败育的主要原因;弱光下蔗糖含量降低引起<i>NnTPS1</i>表达量下降,减弱了对<i>NnSnRK1</i>的抑制可能是诱导荷花花芽败育的关键原因。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1040 1049 5300686 张晓<sup>1</sup>, 任惠惠<sup>1</sup>, 曹婧<sup>1</sup>, 苗其军<sup>2</sup>, 金奇江<sup>1</sup>, 王彦杰<sup>1</sup>, 徐迎春<sup>1</sup> 大螟乙酰胆碱酯酶基因的克隆及其多态性分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906009 <b>[目的]</b> 本研究旨在通过克隆大螟的乙酰胆碱酯酶基因<i>ace</i>,进行多态性分析,以便寻找抗药性相关的突变位点,为建立高通量药剂筛选方法和适宜的抗药性分子检测方法提供新途径。<b>[方法]</b> 利用PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆大螟的<i>ace</i>全长序列,通过分子特征和构建系统发育树对其进行验证。通过序列比对,分析不同地理种群大螟<i>ace</i>基因的多态性,寻找经典抗药性突变位点,同时测定相应种群的三唑磷抗性,联合分析相关的抗药性突变位点。<b>[结果]</b> 克隆获得了大螟2个<i>ace</i>基因的全长cDNA,分别将其命名为<i>Sinace1</i>和<i>Sinace2</i>(GenBank登录号分别为MK641586和MK641585)。它们均含有乙酰胆碱酯酶家族的保守结构特征,系统发育树分析表明它们和鳞翅目近缘种的<i>ace</i>基因亲缘关系最近。关键靶标基因<i>Sinace1</i>在4个地理种群的97条基因序列中共发现了比率不同的107种核苷酸多态性位点和21种氨基酸突变类型,但未发现经典抗药性位点的突变。生物测定结果表明:不同地理种群的大螟对三唑磷的敏感性相差较小(1~5倍),对比分析也没有发现种群之间突变比率与抗性水平一致的突变位点。<b>[结论]</b> 大螟<i>ace1</i>基因尚未产生可测定的抗药性突变,但本研究率先克隆报道了大螟的2个ace基因全长序列,并揭示了大螟不同地理种群<i>ace1</i>基因的主要多态性位点。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1050 1058 2970463 黄磊<sup>1</sup>, 彭英传<sup>2</sup>, 韩召军<sup>1</sup> 斜纹夜蛾气味结合蛋白基因<i>GOBP2</i>转录调控区的克隆及活性分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906010 <b>[目的]</b> 本文旨在鉴定重要农业害虫斜纹夜蛾(<i>Spodoptera litura</i>)气味结合蛋白基因<i>GOBP2</i>的顺式作用元件,为揭示<i>GOBP2</i>的转录调控机制和开发基于嗅觉干扰的害虫防治技术奠定基础。<b>[方法]</b> 利用5’RACE技术克隆<i>GOBP2</i>的5’UTR,确定转录起始位点;利用染色体步移技术(chromosome walking)克隆<i>GOBP2</i>的5’侧翼区,并利用在线网站预测转录因子结合位点;利用PCR克隆<i>GOBP2</i>的5’侧翼区逐步缺失片段,并构建到pGL3-Basic载体上;将各重组载体分别转染Sf9细胞,48 h后收获细胞并利用双荧光素酶报告系统检测转录活性。<b>[结果]</b> 获得斜纹夜蛾<i>GOBP2</i>长23 bp的5’UTR,由此确定<i>GOBP2</i>的转录起始位点。通过染色体步移获得斜纹夜蛾<i>GOBP2</i>的5’端调控区2 025 bp的序列,发现启动子的典型TATA框;针对-1 000 bp序列的转录活性分析表明,最强转录活性区域位于-243~-207 bp,具有1个增强子;此外,在-971~-891 bp及-890~-811 bp各有1个增强子,在-244~-315 bp存在1个沉默子。<b>[结论]</b> 获得斜纹夜蛾<i>GOBP2</i>的转录起始位点及顺式作用元件,为进一步研究<i>GOBP2</i>的转录调控机制奠定了基础。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1059 1066 1860400 韩琪, 胡波, 李升云, 董双林 线硫醚在水、土壤及2种蔬菜中的残留检测方法 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906011 <b>[目的]</b> 本文旨在建立线硫醚在水、土壤、黄瓜和辣椒中的残留检测方法。<b>[方法]</b> 水样中线硫醚用LC-18固相萃取小柱提取、富集;土壤样品采用丙酮和水(体积比为3:1)超声提取,LC-18固相萃取小柱净化;辣椒样品匀浆后用丙酮超声提取,石油醚萃取净化;黄瓜样品匀浆后用丙酮超声提取时加微量甲酸,石油醚萃取,50 mg <i>N</i>-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)净化。经前处理的所有样品均采用高效液相色谱-紫外检测器进行定量检测。<b>[结果]</b> 高效液相色谱法检测线硫醚,在0.01~10.00 mg·L<sup>-1</sup>内线性关系良好,相关系数(<i>R</i><sup>2</sup>)为0.999 8,仪器最低检出限为0.01 mg·L<sup>-1</sup>。在试验添加浓度范围内,水中线硫醚的平均添加回收率为97.38%~100.25%,相对标准偏差(<i>RSD</i>)为1.22%~2.40%;土壤中线硫醚的加标平均回收率为92.73%~103.87%,<i>RSD</i>为2.21%~5.63%;黄瓜中线硫醚的加标平均回收率为91.83%~103.91%,<i>RSD</i>为1.11%~6.24%;辣椒中线硫醚的加标平均回收率为91.06%~106.29%,<i>RSD</i>为0.72%~6.76%。<b>[结论]</b> 建立的环境介质和2种蔬菜中线硫醚的残留检测方法,其准确度和精密度均能满足环境中农药残留分析的要求。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1067 1072 1632889 王馨蔷, 张文圣, 陈兆杰, 朱椿元, 熊伟宏, 杨红 谷氨酸合酶在灵芝中生物学功能的研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906012 <b>[目的]</b> 通过对谷氨酸合酶(glutamate synthase,GOGAT)的基因序列进行预测和分析,构建谷氨酸合酶基因的沉默转化子,验证谷氨酸合酶在灵芝吸收、利用氮源、生长及次级代谢中的作用。<b>[方法]</b> 利用真菌中已报道的谷氨酸合酶基因,在灵芝基因组库中分析比对得到灵芝中可能的谷氨酸合酶基因。通过构建进化树和结构域分析及酶活性测定,确定灵芝谷氨酸合酶序列。随后利用RNA干扰技术,将灵芝的<i>GOGAT基因进行沉默,研究GOGAT</i>对灵芝生长及次级代谢的影响。<b>[结果]</b> 获得灵芝谷氨酸合酶序列,该酶具有保守的谷氨酸合酶结构域,并且在进化上高度保守。在4种氮源(谷氨酰胺、铵盐、脯氨酸和硝酸盐)条件下检测谷氨酸合酶活性和基因转录水平,野生菌株中的GOGAT比酶活和转录水平在不同氮源条件下没有显著变化。通过RNA干扰方法,获得沉默效率分别为(77.0±1.9)%和(77.5±2.0)%的<i>GOGAT</i>沉默菌株2株。平板试验表明,将<i>GOGAT</i>沉默后,灵芝菌丝的生长受到一定程度的抑制。在硝酸盐培养条件下,相比于野生菌株,<i>GOGAT</i>沉默菌株基本停止生长;而在脯氨酸存在条件下,2株沉默菌株的生长直径分别降低(16.0±1.9)%和(21.0±1.3)%。进一步检测灵芝三萜含量发现,当使用铵盐或脯氨酸作为唯一氮源培养时,相比于对照菌株,<i>GOGAT</i>沉默菌株中的灵芝三萜含量分别降低(32.1±4.5)%和(11.0±1.1)%;而以谷氨酰胺和硝酸盐培养时,各菌株中的灵芝三萜含量没有显著变化。<b>[结论]</b> 本研究获得了灵芝中合成谷氨酸的重要酶基因<i>GOGAT</i>,发现其对灵芝的生长及次级代谢十分重要。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1073 1079 1722646 朱静, 岳思宁, 陈琛, 宋书琪, 连玲丹, 赵明文 烟草中异源表达<i>AtPAP2</i>对细胞分裂素敏感性的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906013 <b>[目的]</b> 本文旨在研究黄酮类化合物含量的变化对植物幼苗中细胞分裂素的响应。<b>[方法]</b> 以稳定遗传的<i>35S∷AtPAP2</i>转基因烟草作为试验材料,以细胞分裂素典型的生理效应(抑制主根伸长生长和诱导离体叶片不定芽的再生)为试验模式系统,研究转基因烟草对细胞分裂素的响应。通过分析内源黄酮类化合物的含量,并结合外源施用,初步分析转基因烟草对细胞分裂素敏感的可能机制。<b>[结果]</b> 6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)(0.2~2.0 μmol·L<sup>-1</sup>)和植物体内天然存在的细胞分裂素(反式玉米素和异戊烯基腺嘌呤)处理野生型和转基因烟草,均抑制主根的伸长生长,对转基因烟草的抑制效应明显强于野生型,表明转基因烟草对细胞分裂素的响应更敏感。6-BA处理3 h后,可诱导野生型和转基因植物细胞分裂素响应基因<i>ARR</i>的表达,6-BA的诱导效果在转基因植株上更显著。利用细胞分裂素诱导离体叶片不定芽再生的试验系统,发现转基因烟草长愈伤组织的叶片比例和离体叶片上长芽的平均数均高于野生型,也表明转基因烟草对细胞分裂素的响应更敏感。通过UPLC分析发现,转基因烟草中槲皮素含量明显高于野生型。在培养基中添加50 μmol·L<sup>-1</sup>槲皮素也可以提高野生型烟草幼苗对细胞分裂素的敏感性,而添加生长素极性运输抑制剂2,3,5-三碘苯甲酸和萘基邻氨甲酰苯甲酸则显著增强6-BA对主根伸长生长的抑制效应。<b>[结论]</b> 在烟草体内过表达<i>AtPAP2</i>基因,可以提高内源槲皮素的含量,进而通过影响生长素的极性运输来调节植物对细胞分裂素的敏感性。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1080 1087 2076912 丁冠群<sup>1</sup>, 刘雪霞<sup>1</sup>, 原乔慧<sup>1</sup>, 杨娜<sup>1</sup>, 李楠<sup>2</sup>, 吴寒<sup>2</sup>, 甘立军<sup>1</sup>, 李义<sup>2</sup> 蕉园土壤及香蕉植株不同组织可培养细菌的群落特征 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906014 <b>[目的]</b> 本研究旨在比较抑病型与导病型蕉园土体、香蕉根际及不同组织内生可培养细菌群落的组成及功能差异。<b>[方法]</b> 在R2A培养基上分离、筛选,结合16S rDNA测序分析可培养细菌的组成及拮抗尖孢镰刀菌能力。<b>[结果]</b> 分离细菌766株,经鉴定分别属于放线菌门、拟杆菌门、厚壁菌门及变形菌门;蕉园土壤、香蕉根际土壤及不同组织间细菌组成有明显差异,假单胞菌属在抑病型蕉园样品中的平均相对丰度高于导病型蕉园样品,是抑病型蕉园处理区别于导病型蕉园处理最为重要的生防菌。进一步从抑病型蕉园筛选到假单胞菌362株,其数量和多样性均高于导病型蕉园;但导病型蕉园样品中筛选的假单胞菌中具有拮抗尖孢镰刀菌能力的菌株比例高于抑病型蕉园样品。<b>[结论]</b> 蕉园土壤及香蕉不同植株组织是决定可培养微生物群落结构的第一影响因素,土壤抑病能力对其影响不显著。抑病型及导病型蕉园土壤和香蕉不同组织内生菌群落组成有明显差异,尤其是具有生防潜能的假单胞菌属的组成及功能差异明显。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1088 1097 2351811 吕娜娜<sup>1</sup>, 沈宗专<sup>1</sup>, 陶成圆<sup>1</sup>, 欧燕楠<sup>1</sup>, 王蓓蓓<sup>2</sup>, 阮云泽<sup>2</sup>, 李荣<sup>1</sup>, 沈其荣<sup>1</sup> 一株高效柴油降解菌<i>Serratia</i> sp.J-3的筛选、鉴定和降解特性 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906015 <b>[目的]</b> 本文旨在筛选出不同种类和特性的高效降解柴油菌株,研究降解菌株对不同环境下柴油污染的降解机制。<b>[方法]</b> 从南京扬子石化厂区的油泥沉积物中分离出1株高效柴油降解菌J-3,通过细菌形态学、生理生化及16S rRNA基因序列分析比对初步鉴定菌株J-3为沙雷氏菌属(<i>Serratia</i> sp.)。通过水培及土壤培养并结合气质联用(GC-MS)和全基因组比对技术研究其降解率和降解机制。<b>[结果]</b> 该菌能利用柴油为唯一碳源生长,产生表面活性物质,具有稳定的乳化性能。在温度20~40℃、初始pH5~9条件下生长良好,能耐受15 g·L<sup>-1</sup> NaCl和5 g·L<sup>-1</sup>柴油。在最适生长条件(pH7,25℃,1 g·L<sup>-1</sup> NaCl,0.5 g·L<sup>-1</sup>柴油)下对柴油降解率为62.0%,GC-MS图谱分析确定菌株J-3对柴油中各组分均有降解能力,对部分中长直链烷烃降解率超过99%。通过菌株J-3的全基因组比对分析,发现2个烷烃氧化相关的基因,烷烃羟化酶基因<i>alkB</i>和长链烷烃羟化酶基因<i>almA</i>,推断菌株J-3能降解柴油可能是这2个氧化酶基因产生作用。将菌株J-3应用于柴油污染土壤修复试验,对土壤中各柴油组分均有降解能力。不同处理下菌株J-3降解率可达33.8%~49.0%,可有效降解土壤中的柴油。<b>[结论]</b> <i>Serratia</i> sp.J-3是一株高效降解柴油的菌株,在水体和土壤中均能很好利用柴油进行生长代谢,可应用于柴油污染实际生物修复工程。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1098 1107 2954646 李志琳<sup>1</sup>, 解宇峰<sup>2</sup>, 吴杰<sup>1</sup>, 徐佳迎<sup>1</sup>, 王珏<sup>1</sup>, 蒋静艳<sup>1</sup> 江苏盐城大丰滨海滩涂典型湿地土壤细菌群落结构分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906016 <b>[目的]</b> 本文旨在研究江苏盐城大丰地区碱蓬湿地、芦苇湿地、互花米草湿地、盐蒿湿地和原始光滩等5种滨海湿地生境土壤细菌群落组成结构特征,阐明不同滨海湿地生境对土壤细菌群落的调控作用及驱动机制,为滨海湿地资源合理开发与生物多样性保护提供指导意义。<b>[方法]</b> 利用高通量测序技术对滨海湿地土壤细菌群落进行16S rRNA测序,利用微生物信息学方法对序列进行OTU (操作分类单元)聚类、物种注释、多样性指数、功能预测以及环境因子关联分析。<b>[结果]</b> 土壤细菌群落中特有细菌OTU种类数从大到小依次为盐蒿湿地、芦苇湿地、互花米草湿地、碱蓬湿地、原始光滩地;土壤细菌群落多样性指数从高到低依次为芦苇湿地、盐蒿湿地、互花米草湿地、原始光滩地、碱蓬湿地。盐生细菌群落结构变化,一部分受到全钾(TK)与碳素耦合作用影响,另一部分受到Na<sup>+</sup>与钠吸附比的影响。土壤中Na<sup>+</sup>、钠吸附比(SAR)、土壤多酚氧化酶(PPO)活性、土壤碱性磷酸酶(AKP)活性、全氮(TN)等是驱动细菌群落结构变化的主要环境因子;NH<sub>4</sub><sup>+</sup>-N、PPO和AKP三者形成偶联关系,共同影响土壤细菌群落的生物多样性。<b>[结论]</b> 滨海湿地植被类型和主要环境因子在稳定土壤细菌群落结构及生物多样性方面起到关键作用。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1108 1117 4240569 李秋霞, 郭加汛, 周晓辉, 何也, 刘叶楠, 许斌, 赵耕毛 口服表达猪流行性腹泻病毒S蛋白的重组枯草芽胞杆菌对母猪乳源性免疫力的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906017 <b>[目的]</b> 通过给母猪口服表达猪流行性腹泻病毒(PEDV) S蛋白的重组枯草芽胞杆菌以评估其产生的乳源性免疫力,从而为仔猪提供相应的保护。<b>[方法]</b> 分别给母猪口服2 mL重组枯草芽胞杆菌(1×10<sup>9</sup> CFU·mL<sup>-1</sup>)和肌肉注射2 mL灭活PEDV疫苗(1×10<sup>7</sup> TCID<sub>50</sub>·mL<sup>-1</sup>),产后1 d收集相应的样品。首先检测了乳汁中特异性SIgA及乳汁细胞中特异性IgA,然后对口腔和鼻腔分泌物中特异性SIgA和细胞因子(INF-γ和TGF-α)的水平进行了检测;最后评估乳汁中的中和抗体滴度。<b>[结果]</b> 口服重组枯草芽胞杆菌后乳汁中SIgA及其乳汁细胞中IgA特异性抗体水平显著提高(<i>P</i>&lt;0.05,<i>P</i>&lt;0.01),同时乳汁及其乳汁细胞中INF-γ和TGF-α的水平也显著提高(<i>P</i>&lt;0.05,<i>P</i>&lt;0.01);鼻腔和口腔分泌物中特异性SIgA显著增加(<i>P</i>&lt;0.05,<i>P</i>&lt;0.01);口服重组枯草芽胞杆菌的母猪乳汁中和抗体滴度为1:128,而肌注组母猪为1:64。<b>[结论]</b> 口服表达PEDV S蛋白的重组枯草芽胞杆菌可提高母猪乳汁中体液免疫和细胞免疫水平,为预防新生仔猪PED的发生提供充足的乳源性免疫力。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1118 1123 1418794 刘朋<sup>1</sup>, 徐宏军<sup>2</sup>, 王麒文<sup>2</sup>, 王永恒<sup>1</sup>, 董婷婷<sup>2</sup>, 杨倩<sup>1</sup> 一株雏鹅痛风型鹅星状病毒的分离鉴定及其生物学特性研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906018 <b>[目的]</b> 2017年以来,在中国东部地区的许多鹅场中,4-16日龄雏鹅暴发了严重的痛风,导致2%~20%的死亡率,给养鹅场带来巨大经济损失,本试验旨在分离、鉴定导致此次雏鹅痛风的病原并分析其生物学特性。<b>[方法]</b> 将发病雏鹅病料接种10日龄鹅胚,分离病毒,通过PCR、基因测序和系统进化分析对分离的病毒进行鉴定;病毒尿囊液接种鹅肾脏上皮细胞测定病毒滴度;攻毒扬州白鹅雏鹅进行动物回归实验,观察剖检和组织病理变化,PCR方法检测肛拭子和各脏器病毒含量,ELISA方法检测血清中尿酸含量。<b>[结果]</b> 从第3代鹅胚尿囊液中分离到一株鹅星状病毒(GAstV),命名为JSHA株。对星状病毒<i>ORF2</i>基因氨基酸进化树的分析结果表明,JSHA毒株与2018年从患痛风的鹅上分离得到的星状病毒毒株(SD01、SDPY、GD)具有99%以上的同源性,而与其他禽星状病毒同源性仅为27.3%~57.0%。阳性尿囊液感染鹅胚肾脏上皮细胞后出现变圆、聚团和脱落等细胞病变,病毒滴度为10<sup>4.25</sup> TCID<sub>50</sub>·mL<sup>-1</sup>。动物回归实验结果显示,该病毒可致雏鹅25%的死亡率,发病鹅体质量减轻、肾脏发白肿胀、脏器表面和关节腔内尿酸盐沉积以及血清尿酸升高;组织病变表现为肾小管上皮细胞变性坏死,尿酸盐结晶形成,大量炎性细胞浸润,肝脏和脾脏中出现坏死区和炎性细胞浸润;组织病毒载量结果显示肾脏、肝脏和脾脏的病毒载量高于其他组织;雏鹅从感染后3 d开始排毒,排毒高峰出现在6~9 d。<b>[结论]</b> 鹅星状病毒JSHA毒株是此次雏鹅发生痛风的主要原因。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1124 1132 4412176 徐蓉<sup>1</sup>, 陆明青<sup>1</sup>, 张海涛<sup>2</sup>, 黄灿平<sup>2</sup>, 张冠卿<sup>3</sup>, 鲍恩东<sup>1</sup>, 孙卫东<sup>1</sup>, 吕英军<sup>1</sup> 荧光素酶报告系统检测大肠杆菌代谢产物调控STC-1细胞表达胆囊收缩素研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906019 <b>[目的]</b> 本文旨在筛选出可调控肠道Ⅰ细胞表达胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)的大肠杆菌代谢物,建立可方便检测CCK表达的STC-1细胞模型。<b>[方法]</b> 利用分子克隆技术构建含有CCK启动子调控荧光素酶的慢病毒载体,包装慢病毒并感染STC-1细胞,获得STC-1/CCK-Luc细胞系。用大肠杆菌基因敲除株培养液上清处理上述细胞,检测荧光素酶活性,确定可影响CCK表达的大肠杆菌基因及代谢产物。使用纯化的代谢产物处理STC-1细胞及肠道类器官,通过Western blot及免疫荧光法检测CCK表达水平的变化。<b>[结果]</b> 酶切鉴定及DNA测序表明慢病毒载体构建成功,荧光素酶活性检测发现大肠杆菌Δ<i>SapD</i>株菌液上清可显著抑制荧光素酶的表达。敲除<i>SapD</i>基因可以使培养液中腐胺水平下降,而腐胺可以上调STC-1细胞及肠道类器官中CCK的表达。<b>[结论]</b> 成功构建了能够体外检测CCK表达的细胞系,筛选出1个能够调控CCK表达的大肠杆菌突变体。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1133 1140 2319011 余倩<sup>1</sup>, 张玉宇<sup>1</sup>, 张曾娣<sup>2</sup>, 朱伟云<sup>1</sup>, 黄赞<sup>1</sup> 补偿生长对湖羊肝脏组织中Hippo信号通路相关基因表达的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906020 <b>[目的]</b> 本试验旨在探究早期能量限饲与后期能量补偿对湖羊生长性能、肝脏组织中Hippo信号通路核心基因和AMPK蛋白表达的影响。<b>[方法]</b> 选择32只系谱背景清楚、体质量相近的3月龄雄性湖羊羔羊,随机均分为对照组和补偿生长组。试验分为能量限饲(60 d)和补偿(90 d)2个阶段,能量限饲阶段对照组和试验组饲喂日粮的代谢能分别为11.64和6.84 MJ·kg<sup>-1</sup>,在能量补偿阶段日粮的代谢能均为12.86 MJ·kg<sup>-1</sup>。饲养结束后屠宰,测定,再通过RT-qPCR和Western blot检测肝脏组织中Hippo通路核心基因和AMPK蛋白的表达变化。<b>[结果]</b> 在能量限饲阶段,与对照组相比,能量限饲显著降低了补偿组湖羊的肝脏质量和体质量(<i>P</i>&lt;0.05),湖羊肝脏组织中Hippo通路核心基因和YAP1蛋白的表达量显著降低(<i>P</i>&lt;0.05),而AMPK的mRNA和蛋白磷酸化水平显著升高(<i>P</i>&lt;0.05)。在能量补偿阶段,补偿组湖羊的肝脏质量和体质量、湖羊肝脏组织中Hippo通路核心基因(除<i>YAP1</i>外)的表达量和AMPK蛋白的磷酸化水平均与对照组差异不显著。<b>[结论]</b> 湖羊在适当水平的能量限饲后进行补偿处理具有补偿生长现象,Hippo通路和AMPK蛋白可能共同参与不同营养水平下对湖羊肝脏发育的调节。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1141 1149 2626340 张国敏<sup>1,2</sup>, 程春雨<sup>2</sup>, 刘建玲<sup>2</sup>, 安世钰<sup>2</sup>, 张婷婷<sup>2</sup>, 王子玉<sup>2</sup>, 孟繁星<sup>3</sup>, 樊懿萱<sup>2</sup>, 雷治海<sup>1</sup>, 王锋<sup>2</sup> <i>ESR、FSHβ、AHR</i>基因多态性对二花脸猪产仔数的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906021 <b>[目的]</b> 本文旨在通过研究猪<i>ESR、FSHβ</i>和<i>AHR</i>基因多态性对二花脸群体产仔数的影响,鉴别出影响二花脸猪产仔数变异的关键基因。<b>[方法]</b> 对303头二花脸猪进行<i>ESR</i>基因g.14418786、<i>FSHβ</i>基因g.30398474_30398475ins292(292 bp大片段插入)、<i>AHR</i>基因g.86550830位点分型(Sscrofa11.1),用Excel 2003软件进行基因多态性分布的分析和卡方检验,并利用SAS 9.2软件混合模型对<i>ESR、FSHβ、AHR</i>基因及其合并基因型与产仔数进行关联性分析。<b>[结果]</b> <i>ESR</i>基因g.14418786、<i>FSHβ</i>基因g.30398474_30398475ins292以及<i>AHR</i>基因g.86550830位点在二花脸群体中均具有多态性,且3个基因的不同等位基因频率差异很大,<i>ESR</i>基因g.14418786位点A、B等位基因频率分别为0.173和0.827,<i>FSHβ</i>基因g.30398474_30398475ins292位点A、B等位基因频率分别为0.889和0.111,而<i>AHR</i>基因g.86550830位点G、T等位基因频率分别为0.889和0.111。<i>ESR</i>基因g.14418786位点的AA、AB和BB基因型频率分别为0.050、0.248和0.703,<i>FSHβ</i>基因g.30398474_30398475ins292的AA、AB和BB基因型频率分别为0.808、0.162和0.030,<i>AHR</i>基因g.86550830位点的GG、GT和TT基因型频率则为0.792、0.194和0.013。<i>ESR</i>基因g.14418786与<i>FSHβ</i>基因g.30398474_30398475ins292位点显著偏离哈代-温伯格平衡(<i>P</i>&lt;0.05),而<i>AHR</i>基因g.86550830位点符合哈代-温伯格平衡(<i>P</i>&gt;0.05)。关联性分析未发现<i>ESR、FSHβ、AHR</i>基因以及3个基因的合并基因型显著影响二花脸猪的产仔数(<i>P</i>&gt;0.05)。<b>[结论]</b> 本试验未能证明<i>ESR、FSHβ</i>和<i>AHR</i>基因是影响二花脸猪产仔数的主效基因,二花脸猪产仔数变异可能受其他基因影响。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1150 1157 966018 张倩<sup>1,2</sup>, 方宇瑜<sup>1,2</sup>, 李平华<sup>1,2</sup>, 马翔<sup>1,2</sup>, 蒋能静<sup>1,2</sup>, 黄媛<sup>3</sup>, 陆志强<sup>4</sup>, 季铮渝<sup>1</sup>, 黄瑞华<sup>1,2</sup> 膨化饲料中蛋白水平对大规格鳙生长、消化酶活性和抗氧化能力的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906022 <b>[目的]</b> 本文旨在探讨饲料蛋白水平对大规格鳙(<i>Aristichthys nobilis</i>)生长、血液生化指标和抗氧化酶活性的影响。<b>[方法]</b> 以鱼粉、豆粕为主要蛋白源,制备蛋白水平质量分数分别为20%、24%、28%、32%、36%和40%的6种膨化饲料饲养鳙8周。<b>[结果]</b> 鳙的生长性能(增重率、特定生长率、饲料效率)均在饲料蛋白水平32%时达最佳值;当饲料蛋白水平在28%时,蛋白质效率和蛋白质保留率表现最好;饲料蛋白水平对鳙的肥满度具有显著影响(<i>P</i>&lt;0.05),而对肝体指数和脏体指数均无显著影响(<i>P</i>&gt;0.05)。饲料蛋白水平对鳙前、中肠淀粉酶活性均无显著影响(<i>P</i>&gt;0.05),当蛋白水平为28%时,后肠淀粉酶活性显著高于其他试验组(<i>P</i>&lt;0.05);饲料蛋白水平对鳙前、中、后肠脂肪酶活性均无显著影响(<i>P</i>&gt;0.05);中后肠蛋白酶活性随饲料蛋白水平的提高呈先升后降的趋势,均在蛋白水平为28%时达最高,且显著高于其他组(<i>P</i>&lt;0.05),而前肠蛋白酶活性无明显变化(<i>P</i>&gt;0.05)。36%和40%蛋白组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性显著高于其他组(<i>P</i>&lt;0.05);32%蛋白组葡萄糖和补体C<sub>3</sub>含量显著高于其他组(<i>P</i>&lt;0.05),而饲料蛋白水平对鳙血清中总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和溶菌酶(LZM)均无显著影响。丙二醛含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性都在28%蛋白组达最佳值,但与32%蛋白组无显著差异(<i>P</i>&lt;0.05)。<b>[结论]</b> 以特定生长率和蛋白质效率为指标,采用二次曲线模型分析表明鳙膨化饲料中蛋白质的适宜需求水平为29.28%~32.44%。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1158 1166 1336289 余含<sup>1</sup>, 戈贤平<sup>1</sup>, 孙盛明<sup>2</sup>, 朱健<sup>2</sup>, 任鸣春<sup>2</sup>, 张武肖<sup>1</sup>, 苏艳莉<sup>1</sup>, 米海峰<sup>3</sup> 亚麻籽胶对玉米油乳状液乳化特性的影响 /oa/darticle.aspx?type=view&id=201906023 <b>[目的]</b> 本文旨在研究不同含量亚麻籽胶(FG)对玉米油乳状液乳化特性的影响。<b>[方法]</b> 分别配制FG质量分数为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%和玉米油质量分数均为10%的5种玉米油乳状液,测定不同含量FG玉米油乳状液的液滴粒径、光学显微结构、乳化活性、流变特性、乳化稳定性及高场核磁共振等指标。<b>[结果]</b> 随着FG含量的增加,乳状液液滴粒径显著减小(<i>P</i>&lt;0.05),乳析指数显著降低;乳状液的表观黏度以及<i>G</i>’与<i>G</i>″值明显增加,乳化活性显著增加,高场<sup>1</sup>H和<sup>13</sup>C核磁共振的光谱线宽均增加。显微图像还显示,FG含量从0.1%增至0.4%时,液滴聚集程度逐渐降低;从0.4%增至0.5%时,聚集程度又逐渐增加。<b>[结论]</b> FG的添加(0.1%~0.5%)可以提高玉米油乳状液的乳化稳定性,FG为0.4%时制得的含10%玉米油的乳状液最稳定。 2019年11月15 00:00 2019年6期 1167 1172 1628044 冯美琴<sup>1</sup>, 孙健<sup>2</sup>, 杨勇胜<sup>1</sup>, 王海燕<sup>1</sup>, 颜玉华<sup>1</sup>